Методические рекомендации "Экспертное исследование наркотических средств, получаемых из фенилпропаноламина" (утв. Постоянным Комитетом по контролю наркотиков, протокол 16 января 2003 г. N 1/87-2003)
По состоянию на 25 сентября 2006 года
(Одобрены и рекомендованы к публикации Методическим и редакционно-издательским советом ЭКЦ МВД России)
Введение
В последние годы в незаконном обороте наркотиков все больше появляется синтетических психотропных веществ и наркотических средств, получаемых из фенилпропаноламина: катинон (альфа-аминопропиофенон) и амфетамин. Источником фенилпропаноламина являются лекарственные препараты "Колдакт", "Контак", "Эффект" и др.
Предлагаемая работа представляет собой методику комплексного экспертного исследования наркотических средств, получаемых из фенилпропаноламина.
Исследование предполагает использование комплекса методов: тонкослойной хроматографии, газовой и жидкостной хроматографии, хроматомасс-спектрометрии, ИК спектроскопии.
Краткие сведения об объектах исследования
альфа-Аминопропиофенон - вещество стимулирующего действия, подавляющее чувство усталости, голода, вызывающее состояние эйфории, повышающее общий тонус организма. Употребляется внутривенно.
Это вещество-основание (брутто-формула С9Н11NО; М.м. = 149,19), растворяется в метаноле, хлористом метилене. Структурная формула альфа-аминопропиофенона:
Левовращающий изомер альфа-аминопропиофенона - катинон - включен в Перечень наркотических средств, психотропных веществ и их прекурсоров, подлежащих контролю в Российской Федерации, а также в Список 1 Конвенции о психотропных веществах 1971 г. в раздел "Психотропные вещества". В природе катинон встречается в побегах и листьях вечнозеленого кустарника Catha edulis. Этот кустарник высотой 3-6 м произрастает в Восточной Африке и Южной Аравии. Собранные побеги и листья кустарника называются катом. Потребление ката широко распространено среди населения Сомали, Эритреи, Эфиопии и Йемена. 100 г свежесобранного ката содержат примерно 36 мг катинона.
В России альфа-аминопропиофенон нелегально изготавливают из фенилпропаноламина, содержащегося в лекарственных средствах "Эффект", "Контак", "Колдакт" и др., аналогично получению эфедрона из эфедрина. В незаконном обороте продукт синтеза встречается в виде слабо окрашенных (желтого или желто-зеленого цвета) жидкостей с запахом уксуса или горького миндаля.
Схема химической реакции, протекающей в процессе изготовления, выглядит следующим образом:
Амфетамин (другие названия - "крокодил", фенамин, бензедрин, адипан) - синтетическое наркотическое средство стимулирующего действия. Впервые был синтезирован в 1887 г. в Германии. В качестве фармацевтического препарата впервые появился в 1932 г. под названием бензедрин. Во время второй мировой войны активно использовался в армиях Германии, Японии, Великобритании и США в качестве средства, подавляющего чувство усталости. Употребляется внутривенно или перорально. Амфетамин вызывает сильную психическую зависимость.
При употреблении амфетамина наблюдается эйфория, тахикардия, расширение зрачков, повышается кровяное давление, появляется потливость, озноб, возможны тошнота и рвота. Может наблюдаться аномальное поведение - повышенная агрессивность, чрезмерная настороженность, возбуждение и нарушение процессов мышления. Эффективная доза амфетамина - 10 мг, время действия - 2-4 ч.
Фармацевтической промышленностью амфетамин выпускается в виде таблеток по 0,01 г. Амфетамин входит также в состав антидота на фосфорорганические отравляющие вещества - Афин. Афин выпускается в виде бесцветной прозрачной жидкости в шприц-тюбиках и ампулах. Это единственный отечественный препарат, содержащий в своем составе амфетамин. Все другие лекарственные формы амфетамина исключены из Государственного реестра лекарственных средств, и, следовательно, их производство и применение в медицинской практике в Российской Федерации запрещено.
В незаконном обороте амфетамин встречается в виде порошкообразного продукта белого, желтого или коричневого цвета. Кроме того, отмечены случаи появления амфетамина в виде таблеток с различными логотипами. Амфетамин-основание (брутто-формула C9H13N; М.м. = 135,21) растворим в этаноле, диэтиловом эфире, хлороформе. Структурная формула амфетамина:
Известны случаи синтеза амфетамина из фенилпропаноламина, при взаимодействии с красным фосфором и кристаллическим иодом, аналогично получению метамфетамина из эфедрина. Конечный продукт представляет собой прозрачную или мутную жидкость от желтого до коричневого цвета со специфическим запахом.
Схема протекающей в процессе изготовления амфетамина химической реакции представлена ниже:
Методики экспертного исследования
Исследование методом качественных цветных реакций
В ходе исследования препаратов, полученных из фенилпропаноламина, часто необходимо выявить признаки их самодельного изготовления. К таким признакам относится наличие в исследуемых продуктах различных исходных веществ неорганических ионов, которые образуются из них при окислении или восстановлении фенилпропаноламина.
Исследование препаратов, содержащих альфа-аминопропиофенон
Обнаружение ацетат-ионов
1. К пробе исследуемой жидкости, предварительно нейтрализованной бикарбонатом натрия или щелочью до рН5-6, добавляют несколько капель 3% водного раствора хлорида железа (III). При наличии в растворе ацетат-ионов появляется темно-красное окрашивание жидкости вследствие образования ацетата железа (III). При добавлении к полученному раствору диэтилового эфира и встряхивании эфирный слой не окрашивается.
2. К 0,1-0,5 мл исследуемой жидкости прибавляют 0,3 мл концентрированной серной кислоты и 0,1 мл этилового или амилового спирта. Полученную смесь осторожно нагревают до кипения. При наличии в пробе ацетат-иона появляется характерный запах этилацетата или амилацетата (запах грушевой эссенции). Запах становится более заметным при разбавлении полученной пробы холодной водой.
Обнаружение ионов марганца
1. При наличии в исследуемой жидкости черно-бурого осадка его переносят в пробирку, добавляют 0,3 мл 10% серной кислоты и несколько крупинок висмутата натрия, либо периодата калия. При необходимости полученную смесь осторожно нагревают до кипения. Появление розовой окраски раствора вследствие образования перманганат-ионов свидетельствует о присутствии марганца в исследуемой пробе. Аналогично исследуют 0,1-0,3 мл жидкости на наличие ионов марганца (II).
2. К нескольким каплям исследуемой жидкости приливают несколько капель водного раствора едкого натра. При этом образуется белый осадок Мn(ОН)2, медленно буреющий из-за окисления на воздухе до Н2МnО3. При добавлении к белому осадку нескольких капель перекиси водорода цвет мгновенно меняется на черно-бурый вследствие быстрого окисления ионов марганца до Н2МnО3.
Исследование препаратов, содержащих амфетамин
Обнаружение йода (I_2)
1. Каплю исследуемой жидкости наносят на фильтр, предварительно пропитанный раствором крахмала и высушенный. При наличии в растворе свободного йода на фильтровальной бумаге появляется сине-фиолетовое пятно комплекса йода с крахмалом.
Обнаружение красного фосфора
1. При наличии в исследуемой жидкости красно-коричневого осадка непрореагировавшего красного фосфора его переносят в пробирку, горловину которой плотно закрывают ватным тампоном. Содержимое прокаливают в пламени спиртовки до образования белого дыма Р4, который фосфоресцирует в темноте.
2. При поджигании красно-коричневого осадка и поднесении к пламени холодной фарфоровой чашки на ней образуется белый налет. Налет смывают водой. Получаемый раствор имеет кислую реакцию из-за образования фосфорной кислоты.
Обнаружение йодид-ионов
1. Каплю исследуемой жидкости наносят на фильтр, пропитанный раствором крахмала и после этого высушенный. На полученное пятно наносят каплю светло-розового раствора перманганата калия либо концентрированной азотной кислоты. При наличии в исследуемой жидкости йодид-ионов появляется сине-фиолетовое пятно комплекса йода с крахмалом.
2. Каплю исследуемой жидкости добавляют к 1% раствору нитрата серебра. При наличии в растворе анионов йода образуется творожистый осадок желтого цвета иодида серебра и фосфата серебра. Йодид серебра не растворяется при подкислении раствора азотной кислотой, но растворяется в большом избытке 25% водного аммиака.
Обнаружение фосфат-ионов
1. Одну-две капли исследуемой жидкости помещают в фарфоровую чашку и добавляют 2-3 капли концентрированной азотной кислоты. При этом наблюдается выделение темно-серого осадка молекулярного йода. После этого смесь упаривают досуха на плитке для удаления HCl, мешающей дальнейшему определению фосфат-ионов. К сухому остатку добавляют 3-4 капли концентрированной азотной кислоты и 2 капли 25% водного раствора аммиака, а затем 5-6 капель 1% водного раствора молибдата аммония, подкисленного азотной кислотой Через 1-2 мин. в пожелтевшем растворе без нагревания образуется мелкокристаллический светло-желтый осадок фосфоромолибдата аммония, растворимый в избытке водного аммиака.
2. К 1 мл 3% водного раствора хлорида железа (III) добавляют кристалл роданида калия, при этом образуется кроваво-красный раствор комплекса. К 2-3 каплям полученного раствора добавляют 1-2 капли исследуемой жидкости. При этом наблюдается резкая перемена цвета с красного на желтый в результате разрушения комплекса с роданидом.
Исследование методом тонкослойной хроматографии
К 0,4-1,0 мл исследуемой жидкости (при исследовании порошкообразного вещества несколько миллиграммов вещества растворяют в 1,0 мл дистиллированной воды) добавляют 1,0-0,4 мл хлороформа, 4-8 капель 25% водного раствора аммиака до рН9-10 и осторожно встряхивают. После расслаивания и отстаивания смеси несколько микролитров хлороформного экстракта наносят на хроматографическую пластину.
Разделение проводят в следующих системах растворителей:
для альфа-аминопропиофенона - толуол-этанол-триэтиламин 9:1:1 и этилацетат-метанол-25% водный раствор аммиака 17:2:1; для амфетамина - толуол-этанол-триэтиламин 9:1:1 и хлороформ-ацетон-этанол-25% водный раствор аммиака 20:20:3:1.
По окончании хроматографирования пластину сушат 30 мин при комнатной температуре, затем выявляют хроматографические зоны по гашению флуоресценции при 254 нм и проявлением раствором нингидрина в ацетоне (0,5 г нингидрина в 40 мл ацетона). После опрыскивания раствором нингидрина в ацетоне хроматографическую пластину выдерживают при комнатной температуре в течение 15 мин, а при плохом проявлении нагревают пластину до 50°С. Вместо ацетона в качестве растворителя при проявлении можно использовать этилацетат; при использовании этанола результаты получаются хуже.
Для хроматографирования используют пластины с немодифицированным слоем силикагеля, такие, как Silufol, Sorbfil, Merck. Значения R_f на пластинах Sorbfil ПТСХ П-А-УФ и Merck DC-Alufolien Kieselgel 60 F254, а также окраска зон после проявления раствором нингидрина приведены в табл. 1-3. Для сравнения в таблицах даны значения R_f фенобарбитала, взятого в качестве образца сравнения, и хлорфенирамина - одного из компонентов исходных лекарственных препаратов ("Колдакт", "Контак", "Эффект").
Таблица 1
Значения R_f и R_s исследуемых соединений в системе толуол-этанол-триэтиламин 9:1:1
---------------T------------------------------------T-------------------¬ ¦ Вещество ¦ Пластины ¦ Окраска ¦ ¦ +------------------T-----------------+хроматографических ¦ ¦ ¦ Merck ¦ Sorbfil ¦зон после обработки¦ ¦ +---------T--------+--------T--------+ раствором ¦ ¦ ¦ R_f ¦ R_s ¦ R_f ¦ R_s ¦ нингидрина ¦ +--------------+---------+--------+--------+--------+-------------------+ ¦Фенилпропано- ¦ 0,18 ¦ 0,39 ¦ 0,17 ¦ 0,36 ¦Сине-фиолетовая ¦ ¦ламин ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +--------------+---------+--------+--------+--------+-------------------+ ¦Амфетамин ¦ 0,40 ¦ 0,86 ¦ 0,39 ¦ 0,83 ¦Желто-коричневая ¦ +--------------+---------+--------+--------+--------+-------------------+ ¦альфа-аминоп- ¦ 0,41 ¦ 0,89 ¦ 0,40 ¦ 0,85 ¦Коричневая ¦ ¦ропиофенон ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +--------------+---------+--------+--------+--------+-------------------+ ¦Хлорфенирамин ¦ 0,52 ¦ 1,13 ¦ 0,52 ¦ 1,10 ¦Нет или¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦светло-серая ¦ +--------------+---------+--------+--------+--------+-------------------+ ¦Фенобарбитал ¦ 0,46 ¦ 1,00 ¦ 0,47 ¦ 1,00 ¦Нет ¦ L--------------+---------+--------+--------+--------+--------------------
Таблица 2
Значения R_f и R_s исследуемых соединений в системе этилацетат-метанол-25% водный раствор аммиака 17:2:1
----------------T-----------------------------------T-------------------¬ ¦ Вещество ¦ Пластины ¦ Окраска ¦ ¦ +----------------T------------------+хроматографических ¦ ¦ ¦ Merck ¦ Sorbfil ¦зон после обработки¦ ¦ +--------T-------+-------T----------+ раствором ¦ ¦ ¦ R_f ¦ R_s ¦ R_f ¦ R_s ¦ нингидрина ¦ +---------------+--------+-------+-------+----------+-------------------+ ¦Фенилпропанола-¦ 0,33 ¦ 0,60 ¦ 0,38 ¦ 0,63 ¦Сине-фиолетовая ¦ ¦мин ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------+--------+-------+-------+----------+-------------------+ ¦Хлорфенирамин ¦ 0,43 ¦ 0,78 ¦ 0,52 ¦ 0,86 ¦Нет или¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦светло-серая ¦ +---------------+--------+-------+-------+----------+-------------------+ ¦альфа-аминопро-¦ 0,59 ¦ 1,07 ¦ 0,60 ¦ 1,00 ¦Коричневая ¦ ¦пиофенон ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------+--------+-------+-------+----------+-------------------+ ¦Фенобарбитал ¦ 0,55 ¦ 1,00 ¦ 0,60 ¦ 1,00 ¦Нет ¦ L---------------+--------+-------+-------+----------+--------------------
Таблица 3
Значения R_f и R_s исследуемых соединений в системе хлороформ-ацетон-этанол-25% раствор аммиака 20:20:3:1
----------------T-----------------------------------T-------------------¬ ¦ Вещество ¦ Пластины ¦ Окраска ¦ ¦ +----------------T------------------+хроматографических ¦ ¦ ¦ Merck ¦ Sorbfil ¦зон после обработки¦ ¦ +--------T-------+-------T----------+ раствором ¦ ¦ ¦ R_f ¦ R_s ¦ R_f ¦ R_s ¦ нингидрина ¦ +---------------+--------+-------+-------+----------+-------------------+ ¦Хлорфенирамин ¦ 0,42 ¦ 0,66 ¦ 0,32 ¦ 0,43 ¦Нет или¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦светло-серая ¦ +---------------+--------+-------+-------+----------+-------------------+ ¦Амфетамин ¦ 0,63 ¦ 0,98 ¦ 0,76 ¦ 1,03 ¦Желто-коричневая ¦ +---------------+--------+-------+-------+----------+-------------------+ ¦Фенилпропанола-¦ 0,78 ¦ 1,21 ¦ 0,85 ¦ 1,15 ¦Сине-фиолетовая ¦ ¦мин ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------+--------+-------+-------+----------+-------------------+ ¦Фенобарбитал ¦ 0,64 ¦ 1,00 ¦ 0,74 ¦ 1,00 ¦Нет ¦ L---------------+--------+-------+-------+----------+--------------------
Следует отметить, что в различных системах компоненты хроматографируются в различном порядке. Поэтому вторая и третья системы могут быть использованы для подтверждения результатов, полученных в первой системе (толуол-этанол-триэтиламин 9:1:1).
При исследовании препаратов только с использованием метода тонкослойной хроматографии для получения достоверных результатов анализ каждого образца необходимо проводить в двух различных системах.
Исследование методом газовой хроматографии
Метод используют как для качественного, так и количественного определения фенилпропаноламина, альфа-аминопропиофенона, амфетамина. Газохроматографическое определение проводят при следующих условиях:
- колонка кварцевая капиллярная длиной 12-25 м и диаметром 0,2-0,32 мм, с метилсиликоновой стационарной фазой (OV-101, SE-30, SE-54, OV-1);
- температура испарителя 220°С;
- температура детектора 290°С;
- температура колонки меняется от 100°С до 280°С со скоростью 10°С/мин;
- газ-носитель - гелий (азот), детектор пламенно-ионизационный;
- ввод пробы осуществляется с делением потока.
В ходе исследования к 0,4-1,0 мл исследуемой жидкости добавляют 1,0-0,4 мл хлороформа, 4-8 капель 25% водного раствора аммиака (до pН9-10) и после встряхивания и отстаивания полученной смеси исследуют нижний хлороформный слой.
Часто альфа-аминопропиофенон и фенилпропаноламин хроматографируются в виде несимметричных пиков. В этом случае необходимо проводить ацетилирование исследуемых веществ. Для этого к 0,4-1,0 мл исследуемой жидкости добавляют 1,0-0,4 мл хлороформа, 4-5 капель 25% водного раствора аммиака (до рН9-10) и после встряхивания и отстаивания полученной смеси хлороформный слой отбирают и добавляют к нему 0,4 мл уксусного ангидрида. После 5 мин. выдержки при комнатной температуре полученный раствор хроматографируют в указанных выше условиях.
Индексы удерживания исследуемых соединений и их ацетильных производных представлены в табл. 4.
Таблица 4
Значения индексов удерживания различных компонентов исследуемых объектов и их ацетильных производных
-------------------------------T--------------------T-------------------¬ ¦ Вещество ¦ Индекс удерживания ¦Индекс удерживания ¦ ¦ ¦ вещества ¦ ацетильного ¦ ¦ ¦ ¦ производного ¦ +------------------------------+--------------------+-------------------+ ¦Амфетамин ¦ 1120 ¦ Не определялся ¦ +------------------------------+--------------------+-------------------+ ¦альфа-аминопропиофенон ¦ 1283 ¦ 1594 ¦ +------------------------------+--------------------+-------------------+ ¦Фенилпропаноламин ¦ 1313 ¦ 1676 ¦ +------------------------------+--------------------+-------------------+ ¦Хлорфенирамин ¦ 2002 ¦ - ¦ L------------------------------+--------------------+--------------------
Количественное определение альфа-аминопропиофенона проводят методом газовой хроматографии с использованием внутреннего стандарта. В качестве внутреннего стандарта используют метил-стеарат либо какой-либо подходящий насыщенный углеводород. Перед определением готовят раствор внутреннего стандарта в хлороформе с концентрацией 1 мг/мл. Пробу исследуемой жидкости объемом около 0,5 мл взвешивают и добавляют к ней 0,5-1,0 мл раствора внутреннего стандарта в хлороформе, 5 капель 25% водного раствора аммиака (до рН9-10) и после встряхивания и отстаивания смеси отбирают как можно больше хлороформного слоя, стараясь не захватить водный слой. Затем проводят еще две экстракции двумя порциями чистого хлороформа. Хлороформные экстракты объединяют, добавляют к ним 0,5 мл уксусного ангидрида и после 5 мин выдержки полученной смеси при комнатной температуре хроматографируют в указанных выше условиях.
Подготовку пробы для количественного определения можно проводить другим способом. Пробу исследуемой жидкости объемом около 0,5 мл взвешивают и добавляют к ней 0,5-1,0 мл раствора внутреннего стандарта в хлороформе, 0,5 мл уксусного ангидрида и после встряхивания и отстаивания смеси исследуют органический (нижний) слой в указанных выше условиях.
Количественное определение амфетамина проводят следующим образом. Пробу исследуемой жидкости объемом около 0,5 мл взвешивают и добавляют к ней 0,5-1,0 мл раствора внутреннего стандарта в хлороформе, 5 капель 25% водного раствора аммиака (до рН9-10) и после встряхивания и отстаивания смеси отбирают как можно больше хлороформного слоя, стараясь не захватить водный слой. Затем проводят еще две экстракции двумя порциями чистого хлороформа. Хлороформные экстракты объединяют и хроматографируют в указанных выше условиях.
Перед определением проводят калибровку хроматографа с использованием чистого внутреннего стандарта, альфа-аминопропиофенона и амфетамина (а-аминопропиофенон при этом ацетилируют).
Относительный массовый коэффициент альфа-аминопропиофенона (при использовании ацетильных производных) относительно метилстеарата равен 1,53, амфетамина - 1,73.
В этом случае расчет содержания альфа-аминопропиофенона и амфетамина проводят по формуле:
Х = (S x m )/(S x m ) x К x 100%,
x ct ct n
где
S_x - площадь пика амфетамина, либо площадь пика ацетильного
производного альфа-аминопропиофенона;
S_ct - площадь пика внутреннего стандарта;
m_ct - количество внутреннего стандарта, мг;
m_n - количество исходной пробы, мг;
К - относительный массовый коэффициент.
Исследование методом хроматомасс-спектрометрии
Метод используют для качественного выявления компонентов. Исследование проводят в следующих условиях:
- ионизация электронным ударом (энергия 70 эВ);
- колонка кварцевая длиной 12-20 м и диаметром 0,2-0,3 мм, с метилсиликоновой стационарной фазой (OV-101, SE-30, SE-54, OV-1);
- температура испарителя 220°С;
- температура интерфейса детектора 280°С;
- температура колонки меняется от 100 до 280°С со скоростью 10°С/мин;
- газ-носитель - гелий;
- ввод пробы осуществляют с делением потока.
Подготовка пробы аналогична подготовке пробы для газовой хроматографии при качественном выявлении амфетамина и альфа-аминопропиофенона.
Исследование методом жидкостной хроматографии
Оптимизация условий анализа
Анализ проводят на микроколоночных жидкостных хроматографах серии "Милихром" (или аналогичных жидкостных хроматографах) с применением аналитической колонки размером 100 х 2 мм, заполненной обращенно-фазным сорбентом "Separon SGX C18" с размером частиц 5 мкм (либо аналогичным сорбентом). В качестве подвижной фазы используют смесь фосфатный буфер: ацетонитрил. Для приготовления фосфатного буфера в 1 л дистиллированной воды растворяют 12,0 г 82 % орто-фосфорной кислоты, 3,0 г КОН и 3,0 г диэтиламина (буфер указанного состава должен иметь значение рН3; в случае отклонения значения рН буфера от этой величины проводят его корректировку, добавляя водный раствор щелочи или кислоту). Для приготовления подвижной фазы фосфатный буфер смешивают с ацетонитрилом в соотношении, указанном ниже, тщательно перемешивают смесь с помощью магнитной мешалки, фильтруют ее через мембранный фильтр пористостью не более 0,5 мкм и дегазируют, помещая в ультразвуковую ванну на 20 мин или продувая гелием в течение 20 мин (дегазация гелием является более эффективной).
Для оптимизации условий анализа в качестве объекта исследования используют модельную смесь, содержащую фенил-пропаноламин (ФПА), хлорфенирамин - фармакологически активные компоненты, входящие в состав таких лекарственных средств, как "Колдакт", "Эффект", "Contac 400" и некоторых других комбинированных лекарственных форм фенилпропаноламина; а также альфа-аминопропиофенон - один из основных компонентов наркотических средств, получаемых из указанных лекарственных форм путем их окисления.
Применение метода обращенно-фазной жидкостной хроматографии для анализа наркотических средств на основе фенилпропаноламина, получаемых путем его восстановления до амфетамина (при этом обычно используют такие восстановители, как йодистоводородная кислота или смесь кристаллического йода с красным фосфором), категорически недопустимо по причине присутствия в составе продуктов реакции остаточного количества свободного йода, который пагубно воздействует на некоторые детали и узлы хроматографа, а также вызывает необратимые изменения свойств аналитической колонки.
Оптимизация условий анализа сводится к определению соотношения компонентов подвижной фазы - фосфатного буфера и ацетонитрила, а также скорости ее элюирования, при которых удается достичь наилучшего разделения компонентов модельной смеси. Для используемого типа аналитической колонки оптимальными являются следующие условия: изократический режим элюирования смеси фосфатный буфер-ацетонитрил в соотношении 90:10 со скоростью 100 мкл/мин; максимальный объем вводимой в колонку пробы анализируемого вещества - 10 мкл; регистрация хроматограмм - в режиме одновременной работы УФ спектрофотометра на пяти длинах волн - 210, 220, 230, 250 и 280 нм. Рассчитанные по хроматограмме параметры разделения компонентов модельной смеси представлены в табл. 5.
Таблица 5
Хроматографические параметры разделения компонентов модельной смеси
-----------------T-----------------T------------------T-----------------¬ ¦ Анализируемый ¦Абсолютное время ¦Исправленное время¦ Коэффициент ¦ ¦ компонент ¦удерживания, мин.¦удерживания, мин. ¦емкости, отн.ед. ¦ +----------------+-----------------+------------------+-----------------+ ¦Хлорфенирамин ¦ 3,07 ¦ 1,90 ¦ 1,62 ¦ +----------------+-----------------+------------------+-----------------+ ¦Фенилпропанола- ¦ 5,45 ¦ 4,57 ¦ 3,50 ¦ ¦мин ¦ ¦ ¦ ¦ +----------------+-----------------+------------------+-----------------+ ¦аальфа-аминопро-¦ 6,51 ¦ 5,34 ¦ 4,56 ¦ ¦пиофенон ¦ ¦ ¦ ¦ L----------------+-----------------+------------------+------------------
Количественное определение
Для количественного определения фенилпропаноламина и альфа-аминопропиофенона в составе указанных выше комбинированных лекарственных форм и получаемых на их основе наркотических средств используют метод абсолютной градуировки, для чего детектор хроматографа калибруют по растворам индивидуальных веществ с точно известной концентрацией.
Для приготовления градуировочных растворов точные навески стандартных образцов фенилпропаноламина и альфа-аминопропиофенона (в виде хлористоводородных солей) растворяют в подвижной фазе с таким расчетом, чтобы их концентрация в полученных растворах составляла точно 1 мг/мл. Затем путем разбавления этих растворов подвижной фазой готовят растворы с концентрациями 0,50; 0,25; 0,125; 0,0625; 0,0312 и 0,0156 мг/мл. Все приготовленные растворы хроматографируют при неизменных условиях. На основании полученных результатов строят градуировочные графики, определяющие зависимость площади хроматографического пика вещества от его концентрации в растворе. Для фенилпропаноламина и альфа-аминопропиофенона линейная зависимость сигнала, детектируемого на длине волны 210 нм, сохраняется в диапазоне концентраций вещества в растворе от 0,0156 до 0,50 мг/мл.
Предел обнаружения фенилпропаноламина и а-аминопропиофенона определяют по величине достоверно регистрируемого детектором минимального аналитического сигнала - высоте пика на длине волны 210 нм. При этом за минимальную высоту пика принимают сигнал, в 5 раз превышающий уровень флуктуационных шумов, регистрируемых детектором на данной длине волны. Предел обнаружения фенилпропаноламина и альфа-аминопропиофенона для указанных условий анализа составляет величину не менее (1,0-1,5) 10(-7) г, т.е. они могут быть обнаружены в растворах с концентрациями не менее 0,010-0,015 мг/мл (при условии, что объем пробы анализируемого раствора, вводимого в колонку, равен 10 мкл).
Техника хроматографического исследования наркотических средств, получаемых путем окисления комбинированных лекарственных форм фенилпропаноламина
Исследование указанных наркотических средств проводят с целью диагностики их качественного компонентного состава и определения количественного содержания контролируемых компонентов - фенилпропаноламина и альфа-аминопропиофенона. Методика исследования не требует проведения сложной пробоподготовки и сводится только к отбору от исследуемого препарата (чаще всего в виде жидкости) представительной пробы, ее разбавлению подвижной фазой (как правило, в 10-30 раз), фильтрации полученного раствора и его хроматографическому анализу.
Например, к пробе исследуемой жидкости точно измеренного объема - 0,10 мл добавляют точно измеренный объем - 2,90 мл подвижной фазы (кратность разбавления пробы в данном случае равна 30). Полученный раствор тщательно перемешивают в герметично закрытом флаконе, фильтруют через мембранный фильтр пористостью не более 0,5 мкм и хроматографируют в указанных выше условиях.
Диагностику компонентов полученной хроматограммы проводят путем сравнения их времени удерживания и УФ спектров с временем удерживания и УФ спектрами фенилпропаноламина и альфа-аминопропиофенона на хроматограммах свободных образцов (или на хроматограмме модельной смеси), а также методом "добавок". Концентрацию фенилпропаноламина и альфа-аминопропиофенона в анализируемом растворе определяют по градуировочным графикам.
Расчет содержания фенилпропаноламина и альфа-аминопропиофенона - Х (мг) в исследуемом препарате проводят по формуле:
Х = С x V x r,
где
С - концентрация фенилпропаноламина, либо концентрация
альфа-аминопропиофенона в анализируемом растворе исследуемого
препарата, которая определяется по градуировочному графику, мг/мл;
V - исходный объем исследуемого препарата, мл;
r - число, равное кратности разбавления пробы исследуемого препарата.
Исследование методом ИК спектроскопии
Метод применяется для диагностики альфа-аминопропиофенона и хлорфенирамина в экспертных образцах.
При выявлении хлорфенирамина к 0,5-1,0 мл исследуемой жидкости добавляют 0,5 мл хлороформа. Полученную смесь осторожно встряхивают, дают отстояться и после расслаивания полностью отбирают хлороформный (нижний) слой и отбрасывают его. Затем к оставшейся жидкости добавляют еще 0,5 мл хлороформа и после встряхивания и отстаивания снова отбирают как можно больше хлороформа, стараясь не захватить водный слой. Затем таким же образом проводят третью экстракцию, полученные хлороформные экстракты объединяют и упаривают в агатовой ступке при 50°С досуха. Выделенный препарат разбавляют двумя-тремя каплями хлороформа и наносят на кристалл KRS-5 или на окошко из бромида калия, упаривают и записывают ИК спектр в следующих условиях: ИК-Фурье спектрометр Paragon 1000 PC фирмы "Перкин-Элмер" (США) (либо аналогичный ИК спектрометр), диапазон 4000-400 см(-1), разрешение 4 см(-1), количество сканирований - 32. Здесь и далее для подготовки пробы можно использовать также прессование таблеток с бромидом калия.
Спектр хлорфенирамина, полученный описанным выше способом, а также библиотечный спектр хлорфенирамина представлены на рис. 1 и 2.
Для выявления альфа-аминопропиофенона оставшуюся после экстракции хлороформом жидкость еще 2 раза экстрагируют хлороформом, отбрасывая хлороформные экстракты. К оставшейся водной фракции добавляют 0,5 мл хлороформа и 0,5 мл уксусного ангидрида и встряхивают. После расслаивания и отстаивания полученной смеси отбирают как можно больше органического (нижнего) слоя, стараясь при этом не захватить водный слой. Полученный экстракт упаривают в агатовой ступке при 50°С досуха для удаления хлороформа и уксусного ангидрида. Выделенный сухой препарат разбавляют двумя-тремя каплями хлороформа, наносят на кристалл KRS-5 или на окошко из бромида калия, упаривают и записывают ИК спектр в указанных выше условиях.
Для диагностики экспертных образцов, содержащих амфетамин и хлорфенирамин, также можно использовать метод ИК спектроскопии.
При выявлении хлорфенирамина 0,5-1,0 мл исследуемой жидкости, имеющей кислую реакцию среды, осторожно нейтрализуют 25% водным раствором аммиака до рН7 (нейтральной) и добавляют 0,5 мл хлороформа. Полученную смесь осторожно встряхивают, дают отстояться и после расслаивания полностью отбирают и отбрасывают хлороформный (нижний) слой. К оставшейся жидкости добавляют 0,5 мл четыреххлористого углерода, встряхивают и после отстаивания отбирают как можно большее количество органического слоя, стараясь не захватить водный слой. Таким же образом проводят третью экстракцию четыреххлористым углеродом, полученные органические экстракты объединяют, упаривают и наносят на кристалл KRS-5 или на окошко из бромида калия, после чего подсушивают и записывают ИК спектр.
Для выявления амфетамина оставшуюся после экстракции жидкость еще 2 раза экстрагируют хлороформом, отбрасывая хлороформные экстракты. Оставшуюся водную фракцию подщелачивают 25% водным раствором аммиака до рН9-10, к полученной жидкости добавляют 0,8 мл четыреххлористого углерода и встряхивают. После расслаивания и отстаивания полученной смеси отбирают как можно больше органического (нижнего) слоя, стараясь при этом не захватить водный, упаривают, наносят на кристалл KRS-5 или на окошко из бромида калия, подсушивают и записывают ИК спектр.
Методом ИК спектроскопии можно также выявлять указанные компоненты в лекарственных препаратах. Для этого содержимое капсулы исходного препарата тщательно перетирается в ступке до порошкообразного состояния. Затем навеску препарата массой примерно 250 мг растворяют в 2 мл дистиллированной воды, нагревают смесь до 70°С при перемешивании и после охлаждения центрифугируют.
При выявлении хлорфенирамина осветленную после центрифугирования жидкость отбирают и добавляют к ней 0,5 мл четыреххлористого углерода. Полученную смесь осторожно встряхивают, дают отстояться и после расслаивания отбирают как можно большее количество органического слоя. К оставшейся жидкости добавляют 0,5 мл четыреххлористого углерода, встряхивают и после отстаивания снова отбирают органический слой, стараясь не захватить водный. Полученный органический экстракт упаривают и наносят на кристалл KRS-5 или на окошко из бромида калия, после чего подсушивают и записывают ИК спектр.
После первой экстракции проводят еще три экстракции хлороформом. Полученные экстракты отбрасывают.
Для выявления фенилпропаноламина к оставшейся водной фракции добавляют 5 капель 25% водного раствора аммиака и экстрагируют ее 0,5 мл хлороформа. Полученный органический экстракт упаривают, растирают с бромидом калия, прессуют таблетку и записывают ИК спектр.
На рис. 3, 4, 5 приведены полученные таким образом спектры хлорфенирамина и фенилпропаноламина, а также библиотечный спектр фенилпропаноламина.
Использованные источники
1. Handbuch der Rauschdrogen. W. Schmidbauer, J. vom Scheidt.Fischer Taschenbuch Verlag. 1998.
2. Drug Identification Bible. Third Edition, Denver, Colorado.
3. The Merck Index. Twelfth Edition on CD-ROM, 1996. Ver.l2:1.
4. Clarke's isolation and identification of drugs. The Farmaceutical Press. London. 1986.
5. Найденова Н.Г., Найденова И.И., Власова И.Б. Фенилпропаноламиновая токсикомания//Вопросы наркологии. 2000. N 4. С. 16-22.
6. Надеждин А.В., Тетенова Е.Ю., Хохлов С.Е., Авдеев С.В. Злоупотребление амфетаминоподобными веществами, кустарно изготовленными на основе фенилпропаноламина//Вопросы наркологии 2000. N 1. С. 45-49.
------------------------------
* Подготовлены: В.И.Сорокин, Г.В.Любецкий, М.А.Макаров, М.А.Дроздов, О.С.Орлова, Л.А.Семенова, В.П.Мелкозеров, В.А.Потапов, Е.А.Симонов