Методические указания МУК 3.2.988-00 "Методы санитарно-паразитологической экспертизы рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 25 октября 2000 г.)
Архив тесты документа с изменениями и дополнениями на 25 сентября 2006 года
Методические указания МУК 3.2.988-00
"Методы санитарно-паразитологической экспертизы рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 25 октября 2000 г.)
Дата введения: 1 января 2001 г.
1. Область применения и общие положения
1.1. Настоящие методические указание устанавливают методы санитарно-паразитологической экспертизы рыбы и нерыбных объектов промысла (моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся), а также продуктов их переработки (далее по тексту - рыбная продукция).
1.2. Методические указания предназначены для применения в аккредитованных (или аттестованных, или лицензированных) лабораториях (в т.ч. контрольно-производственных) и лабораториях учреждений государственной санитарно-эпидемиологической и ветеринарной служб Российской Федерации, осуществляющих контроль качества гидробионтов и продуктов их переработки на соответствие СанПиН 2.3.2.560-96 и 3.2.569-96, а также научных учреждений, занимающихся изучением паразитарных болезней.
Специалисты лабораторий должны пройти подготовку в заявленной области аккредитации (аттестации, лицензирования), владеть метрологически аттестованными методиками и методами, утвержденными или допущенными к применению Госстандартом и госсанэпидслужбой России и соответствующих требованиям ГОСТа Р 8.563-96 "Методики выполнения измерений".
1.3. Среди всех классов паразитов (простейшие, ракообразные, гельминты и др.), встречающихся в рыбе и других гидробионтах, опасными для здоровья человека являются только личинки гельминтов: цестод, трематод, нематод и скребней. К наиболее социально значимым и широко распространенным заболеваниям, передающимся через рыбу и других гидробионтов, относятся описторхоз, дифиллоботриозы и эндемичные для Дальнего Востока России метагонимоз, нанофиетоз и клонорхоз. Определенную опасность для здоровья людей могут представлять гельминты, приживающиеся, но не развивающиеся до взрослой стадии у человека (использующие его в качестве резервуарного хозяина), что затрудняет диагностику заболевания. Это спирометра, гнатостомы, болбозомы, коринозомы и некоторые виды анизакид и парагонимид. Заражение человека пирамикоцефалусами, апофаллами, криптокотилюсами происходит крайне редко. Других гельминтов (меторхисов, псевдамфистомумов, гетерофиесов, эхинохазмусов и др.) можно отнести к паразитам, спорадически встречающимся у человека на определенных территориях.
1.4. Объектами исследований являются промысловые пресноводные и морские рыбы, моллюски, ракообразные, земноводные, пресмыкающиеся и продукты их переработки.
1.5. Потенциальную опасность для здоровья человека представляют только живые личинки гельминтов. В связи с этим, при паразитологическом инспектировании гидробионтов и продуктов их переработки следует определить жизнеспособность выявленных плероцеркоидов, метацеркарий, акантелл и личинок нематод (см. раздел 5).
1.6. При исследовании гидробионтов и продуктов их переработки следует соблюдать режим работы с инвазионным материалом, регламентированный санитарными правилами 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами".
2. Отбор, хранение и подготовка к анализу проб гидробионтов и продуктов их переработки
Отбор и объем проб рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки для исследования на соответствие требованиям безопасности для здоровья человека по паразитарным показателям осуществляется в соответствии с требованиями:
ГОСТа 7631-85 "Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Правила приемки, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний";
Изменений N 2 к ГОСТу 7631-85 (п.1.2), утвержденному Постановлением Госстандарта СССР от 25.10.89 N 3195;
СанПиНа 3.2.569-96 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации", приложение 3, п.6.2 (при лабораторном контроле рыбной продукции) и п.п. 15.12, 15.13 (при оценке и контроле паразитологического состояния районов промысла (биотопов);
правил по сертификации "Типовой порядок обращения с образцами, используемыми при проведении обязательной сертификации ПР 50.3.002-95".
2.1. Отбор, хранение и подготовка к анализу проб гидробионтов при оценке и контроле паразитологического состояния районов промысла (биотопов)
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Химические реактивы: глицерин; эфир или хлороформ
2. Кюветы эмалированные
3. Чашки Петри
4. Пинцеты хирургические и глазные
5. Препаровальные иглы
6. Химические стаканы
7. Кастрюли эмалированные
8. Электроплитка
9. Холодильник
10. Весы с набором разновесов или весы электронные
11. Сантиметр или линейка
12. Марля, вата
13. Фильтровальная бумага
2.1.1. При оценке паразитологического состояния водоема (района промысла) следует начинать исследовать виды гидробионтов, наиболее подверженные заражению. Так, наилучшими индикаторами неблагополучия водоема в отношении инвазии личинками описторхисов является язь, далее по убывающей - елец, линь и т.д. (см. табл.2), а в отношении Diphyllobothrium latum - щука и налим (см. табл.1).
Для исследования на наличие метацеркарий Opisthorchis felineus и плероцеркоидов D. latum целесообразнее отбирать рыб старших возрастов, т.к. личинки паразитов живут несколько лет, и их число увеличивается с возрастом рыб. Метацеркарии Metorchis bilis (albidus) чаще встречаются у сеголеток и рыб младших возрастов, а Echinochasmus perfoliatus - преимущественно у мальков.
2.1.2. До начала исследования рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных и пресмыкающихся следует точно определить видовую принадлежность исследуемого экземпляра и, руководствуясь табл.1-4 и п.4.4 настоящего документа и табл.9 СанПиНа 3.2.569-96 (прилож.3), определить, потенциальными носителями каких видов гельминтов, опасных для здоровья человека, он является.
Следует помнить, что один и тот же вид позвоночного или беспозвоночного может служить дополнительным или резервуарным (факультативным) хозяином для нескольких видов гельминтов.
2.1.3. Сохранять свежевыловленную рыбу и нерыбных промысловых гидробионтов до исследования следует в охлажденном состоянии (в холодильнике), не допуская кристаллизации, либо в слегка подвяленном на воздухе виде не более 3-5 дней.
2.1.4. Перед исследованием рыбу (или нерыбный объект промысла) отмывают от слизи, протирают, взвешивают, измеряют длину и делают в журнале записи, касающиеся учета исследований (раздел 7).
2.1.5. Для определения возраста у рыб с циклоидной чешуей последнюю берут с передне-боковой поверхности выше боковой линии в количестве 15-20 крупных чешуек. У рыб с ктеноидной чешуей, а также с голой кожей берут отолиты или колючий шип грудного плавника.
2.1.6. Для исследования на наличие метацеркарий Metagonimus yokogawai и Metagonimus katsuradai отбирают по 20 чешуек из разных частей тела рыбы в спинной области, у карася - вдоль боковой линии. Крупные чешуйки (у сазанов, карасей) перед исследованием просветляют в течение 15 - 20 мин в 50%-ном растворе глицерина.
2.1.7. Перед исследованием живых раков и крабов рекомендуется поместить в кипящую воду на 0,5 - 1,5 мин (в зависимости от размеров ракообразных) до прекращения движения или усыпить их эфиром (или хлороформом).
2.2. Хранение и подготовка к анализу рыбной продукции при лабораторном исследовании на производстве, при сертификации, инспекционном контроле
2.2.1. Сохранять свежих или охлажденных гидробионтов и продукты их разделки до исследования следует в холодильнике при температуре 2 - 4°С. Замороженная рыбопродукция (сырье, полуфабрикаты и готовые изделия) до исследования хранится при температуре и в условиях согласно нормативно-технической документации на нее.
2.2.2. Непосредственно перед исследованием мороженую рыбную продукцию размораживают до температуры не ниже 0°С в толще тела рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки. Живых ракообразных усыпляют (см. п.2.1.7).
2.2.3. При исследовании вяленой, соленой и копченой рыбы ее предварительно вымачивают в течение суток до размягчения мышц, меняя воду каждые 4 - 6 ч.
2.2.4. Соленую икру (зернистую, паюсную, ястыковую) выдерживают в воде в течение 2 - 3 ч. Другие виды рыбной продукции (пресервы, жареная рыба, фарш и пр.) специальной подготовки не требуют и сохраняются в холодильнике до начала исследования.
2.2.5. О видовой принадлежности исследуемого образца судят по документам, сопровождающим пробу. При поступлении гидробионтов в виде, позволяющем произвести видовое определение, следует его уточнить.
3. Методы паразитологического исследования гидробионтов и продуктов их переработки
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Химические реактивы: физиологический раствор
2. Предметные стекла
3. Большие предметные стекла (6 - 8 х 12 - 15 см, толщиной 3 - 5 мм) или компрессорий
4. Кюветы эмалированные
5. Деревянная доска
6. Чашки Петри
7. Часовые стекла
8. Пинцеты разных размеров (хирургические, анатомические, глазные)
9. Ножницы
10. Скальпели
11. Препаровальные иглы разной толщины
12. Пипетки стеклянные (пастеровские)
13. Резиновые груши
14. Фильтровальная бумага
15. Марля, вата
16. Лупа
17. Бинокулярный микроскоп типа МБС
18. Осветитель для бинокуляра любой марки
19. Световой микроскоп типа Биолам, Бимам
20. Осветитель к микроскопу любой марки
21. Деревянный молоток
3.1. Принципиальные подходы и выбор метода исследования гидробионтов и продуктов их переработки
3.1.1. При исследовании рыбной продукции используют два основных подхода:
1) выявление личинок гельминтов, видимых невооруженным глазом (плероцеркоиды, акантеллы, личинки нематод размером > 2 мм), путем тщательного осмотра всех органов, полостей и тканей промежуточных (или резервуарных) хозяев;
2) выявление личинок гельминтов, плохо или не видимых невооруженным глазом (в основном метацеркарий трематод и мелких нематод), путем исследования органов и тканей - мест наиболее вероятной их локализации, с использованием оптических средств. Уточнение видовой принадлежности личинок гельминтов в обоих случаях ведется с применением световых микроскопов типа МБС, Биолам или др.
3.1.2. Порядок исследования и необходимость проведения всех или только отдельных его этапов зависит от вида (видов) гельминта, встречающегося в исследуемом гидробионте, типичной локализации личинок в нем (таблицы 1 - 4, пункты 4.4.1, 4.4.2) и вида продукции.
3.1.2.1. При паразитологическом исследовании свежевыловленной и охлажденной рыбы на наличие цестод, нематод и скребней необходимо проводить практически весь предложенный ниже комплекс исследований (п.п. 3.2.1 - 3.2.7, 3.2.11). При поиске плероцеркоидов Diphyllobothrium dendriticum и акантелл рода Bolbosoma основное внимание обратить на рекомендации в пункте 3.2.4, Diphyllobothrium luxi (D.klebanovskii) - в пункте 3.2.11.1, Gnathostoma hispidum и Gnathostoma spinigerum - в пунктах 3.2.11.3 - 3.2.11.4.
На наличие метацеркарий большинства видов трематод - исследуют только верхний слой мышечной ткани и подкожную клетчатку в области спинных мышц (п.3.2.11.3). Для обнаружения метацеркарий Metagonimus yokogawai и Metagonimus kalsuradai в первую очередь исследуют чешую (п.3.2.12), Echinochasmus perfoliatus -жабры (п.3.2.9), Apophallus muhlingi и Rossicotrema donicum - ткани плавников (п.3.2.8), Nanophyetus salmincola - почки (п.3.2.7).
3.1.2.2. Мороженую, соленую, пряную, маринованную, вяленую, сушеную и копченую рыбную продукцию после предварительной подготовки (п.п.2.2.2, 2.2.3) исследуют по методике неполного гельминтологического вскрытия, приведенной ниже (п.п.3.2 - 3.4). При обнаружении личинок гельминтов следует определить их жизнеспособность (раздел 5).
3.1.2.3. Такие продукты переработки рыбы, как пресервы, фарш, жареная или заливная рыба, предварительно осматривают, а затем исследуют компрессорным методом (п.3.2.11.3) или методом переваривания в искусственном желудочном соке (п.3.2.11.4).
3.1.2.4. Рыбу потрошеную обезглавленную, разделанную на тушку, спинку, кусок и филе, лапки земноводных, мышечные ткани и мантию двустворчатых моллюсков, а также мантию головоногих в зависимости от целей паразитологического инспектирования (вида гельминта) исследуют по одной из предложенных методик исследования мускулатуры (п.3.2.11).
3.1.2.5. Икру (гонады), как свежую, так и продукты ее переработки, исследуют в соответствии с пунктом 3.2.6.
3.1.2.6. Молоки (семенники) тщательно осматривают снаружи на наличие полостных паразитов. Внутри молок опасных для здоровья человека паразитов нет.
3.2. Методика неполного гельминтологического исследования рыбы
3.2.1. Рыбу вскрывают в большой эмалированной кювете или на широкой гладкой доске. Прежде всего, проводят наружный осмотр рыбы для выявления личинок, просвечивающих через кожу, извлекают их препаровальной иглой.
3.2.2. Затем вырезают левую стенку полости тела и открывают доступ к последней. Для этого, повернув рыбу брюхом кверху, делают короткий надрез вперед от анального отверстия, куда затем вводят тупой конец ножниц и разрезают рыбу вдоль срединной линии брюшка до угла нижней челюсти. Делают дугообразный надрез, вырезают левую брюшную стенку, отделяют ее. Рыбу кладут на правый бок. При внимательном осмотре полости тела и внутренних органов могут быть обнаружены свободно лежащие или под серозой, или в капсулах личинки цестод, нематод, скребней, видимые невооруженным глазом.
3.2.3. Накладывают лигатуры на кишечник близ анального отверстия и на пищевод в его начальном отделе, чтобы содержимое пищеварительного тракта не вышло наружу. Затем извлекают внутренние органы. Вырезают яичники (икру) или семенники (молоки), помещая их в отдельные чашки Петри, и просматривают. Осматривают плавательный пузырь снаружи и внутри. Вырезают и осматривают сердце, а также сердечную полость. Компрессорным способом исследуют содержимое, оставшееся в полости тела. Последнюю протирают марлевой салфеткой, соскабливают брюшину.
3.2.4. Затем отпрепаровывают комплекс органов пищеварительной системы. В первую очередь выделяют желчный пузырь, лежащий на поверхности печени, так, чтобы его содержимое (в том числе и паразиты) не залило остальные внутренние органы. Затем выделяют пищеварительный тракт, печень, селезенку, поджелудочную железу. Эти органы отделяют друг от друга и от окружающей их жировой ткани и осматривают. Жировую ткань разрезают на тонкие пластинки толщиной около 3 мм или исследуют компрессорно между стеклами на темном фоне или в полупроходящем свете.
Исследуют освобожденный от жировой ткани пищеварительный тракт, отыскивая личинок в капсулах на его поверхности или просвечивающих через серозные покровы (Diphyllobothrium dendriticum, Diphyllobothrium latum, Dioctophyme renale, Eustrongylides exicisus, Corynosoma strumosum, Corynosoma semerse, Bolbosoma caenoforme, личинки сем. Anisakidae). Пилорические придатки (развитые у налима, сиговых, лососевых) расправляют и осматривают снаружи (Pyramicocephalus phocarum). Стенки желудка и пищевода после наружного осмотра исследуют под бинокулярной лупой, подбирая степень увеличения в зависимости от объекта.
3.2.5. При наружном осмотре печени невооруженным глазом можно заметить плероцеркоиды цестод (Diphyllobothrium latum, Pyramicocephalus phocarum, Eustrongylides exicisus) и личинки анизакид. Поджелудочную железу, селезенку, печень осматривают снаружи и также разрезают на пластинки толщиной около 3 мм.
3.2.6. У яичника разрезают оболочку, содержимое соскабливают и компрессуют. Здесь часто встречаются плероцеркоиды Diphyllobothrium latum. Компрессорным методом удобно просматривать лишь мелкую икру. При исследовании крупных икринок следует разбирать их препаровальными иглами в чашке Петри с небольшим добавлением воды.
Соленую икру (зернистую, паюсную, ястыковую) после предварительной подготовки (п.2.2.4) исследуют таким же способом. При исследовании семенников (молок) тщательно просматривают их поверхность.
3.2.7. Последними из внутренних органов исследуют почки, лежащие вдоль позвоночника. Так как ткань почек очень рыхлая, обычно не удается выделить их целиком. Их соскабливают и по частям исследуют компрессорным способом, добавляя несколько капель воды. Почки - орган наиболее вероятной локализации метацеркарий Nanophyetus salmincola.
3.2.8. Отрезают плавники и просматривают их с использованием микроскопа МБС при увеличении 16-48 (окуляр 8х, 12х, объектив 2х, 4х) раз в небольшом количестве воды. Здесь могут быть заметны в виде маленьких черных точек пигментированные цисты Apophallus muhlingi и Rossicotrema donicum, а также метацеркарии Metagonimus yokogawai и Metagonimus katsuradai. Мышцы плавников исследуют компрессорным способом (3.2.11.3).
3.2.9. Снимают жаберную крышку и ножницами вырезают все жаберные дуги. Их по очереди рассматривают в чашке Петри под бинокуляром, перебирая лепестки препаровальными иглами и, следя за тем, чтобы они были покрыты водой. Затем отрезают от дуги лепестки у их основания и, разбирая препаровальными иглами, выявляют паразитов, оставшихся незамеченными. На жабрах можно обнаружить метацеркарий Echinochasmus perfoliatus, Metagonimus yokogawai, Metagonimus katsuradai, Nanophyetus salmincola, Opisthorchis felineus.
3.2.10. После просмотра внутренних органов с рыбы снимают кожу в направлении от головы к хвосту, подрезая ее ножницами и оттягивая хирургическим пинцетом или рукой. Осматривают внутреннюю сторону кожи, а часть мышц, отделившихся с кожей, разрезают на пластинки или соскабливают и компрессуют.
3.2.11. Метод исследования мускулатуры выбирается в зависимости от целей паразитологического контроля (вида гельминта).
3.2.11.1. Метод параллельных разрезов. Метод применяется для обнаружения в мышечной ткани рыбы личинок гельминтов, видимых без использования увеличительных приборов (цестод, нематод, скребней).
Мышечную ткань острым скальпелем разрезают на пластинки толщиной до 5 мм, которые затем раздвигают и просматривают в падающем свете невооруженным глазом. Разрезы можно делать как поперек, так и вдоль мышечных волокон. Делая разрезы мускулатуры и встречая в ее толще крупных личинок или капсулы с личинками (величиной около 1 см и более), нужно извлечь несколько экземпляров паразитов целиком для определения вида.
Выделенных личинок следует поместить в чашку Петри или часовое стекло с физиологическим раствором.
При исследовании тихоокеанских лососей, кунджи и сахалинского тайменя на наличие плероцеркоидов Diphyllobothrium luxi (D. klebanovskii) разрезы проводят поперек мышечных волокон всей дорсальной части тела, большинство личинок локализуется между жировым и спинным плавниками.
3.2.11.2. Метод исследования мышечной ткани на просвет. Используется также для выявления личинок нематод, цестод, скребней. Для применения этого метода необходимо изготовить специальное приспособление - столик с прозрачной крышкой (размером не менее 40 х 40 см, лучше из молочного или матового стекла) и подсветкой снизу. Можно пользоваться столиком микроскопа типа МБС с нижней подсветкой.
Мышечную ткань рыбы (или филе) острым скальпелем или ножом нарезают на пластинки толщиной не более 2 - 3 см.
Куски мышц помещают на верхнюю крышку столика и просматривают. Яркость подсветки и толщина ломтиков в зависимости от степени просвечиваемости мяса конкретного вида рыбы устанавливается опытным путем.
Обнаруженных личинок гельминтов выделяют из мышечных тканей рыбы с помощью препаровальных игл.
Выделенных личинок помещают в чашку Петри или часовое стекло с физиологическим раствором.
3.2.11.3. Компрессорный метод
3.2.11.3.1. Метод применяется в основном для выявления метацеркарии трематод. Это очень мелкие, незаметные или малозаметные невооруженным глазом объекты, поэтому для их обнаружения и дифференциации видовой принадлежности необходимы специальные микроскопические исследования. Используют метод при просмотре мышечной ткани и внутренних органов рыб, а также мышечной ткани ракообразных. Возможно его использование при исследовании внутренних органов рыб на наличие личинок нематод и цестод.
3.2.11.3.2. Целесообразно компрессорному исследованию подвергать органы и участки мышечной ткани наиболее вероятной локализации метацеркарий (табл.2).
3.2.11.3.3. Участок тела наиболее вероятной локализации метацеркарий освобождают от чешуи, затем скальпелем надрезают кожу по средней линии спины и двумя надрезами от первого надреза до боковой линии выделяют участок средней трети спины. Кожу с вычлененного участка поднимают пинцетом и с помощью скальпеля отделяют ее так, чтобы подкожная клетчатка осталась на поверхности мышц. Острым скальпелем соскабливают или срезают тонкие пластинки поверхностного слоя мышц, толщиной не более 2 - 3 мм, размещают их на нижнем стекле компрессория, накрывают другим стеклом и сдавливают их. Наиболее удобно использовать компрессорные стекла, нарезанные из обычного оконного стекла с краями, обработанными наждаком. Размеры стекол 6 - 8 х 12 - 15 см, нижнее стекло немного больше верхнего, толщина 3-5 мм. Срезы просматривают с помощью микроскопа типа МБС, используя увеличение в 16 - 48 раз (окуляр 8х, 12х, объектив 2х, 4х). Для уточнения диагноза кусочки тканей с личинками переносят на предметные стекла, накрывают покровными и исследуют при большем увеличении (например, объектив 8х, 10х, окуляр 7х или 10х, бинокулярная насадка 1,5х) с помощью микроскопа типа Биолам, Бимам.
При обнаружении личинок можно ограничиться просмотром мышц с одной стороны тела. При отсутствии личинок необходимо просмотреть срез и с другой стороны. При исследовании молоди рыб длиной до 20 - 25 мм их компрессуют целиком. Более крупных сеголеток распластывают на две половинки и просматривают в компрессории со стороны разреза, не снимая кожи и не освобождая от чешуи.
Подсыхающие срезы, препараты увлажняют водой или физиологическим раствором из пипетки.
3.2.11.4. Метод переваривания в искусственном желудочном соке
Необходимые реактивы и оборудование (дополнительно):
1. Химические реактивы: пепсин; концентрированная НСl; NaCl; дистиллированная вода
2. Весы с набором разновесов или весы электронные
3. Шпатели (лопаточки) металлические, стеклянные, деревянные
4. Воронки стеклянные разных размеров
5. Мерные цилиндры (0,5 - 0,25 л)
6. Банки стеклянные с притертой пробкой для хранения реактивов (0,1, 0,25, 0,5 л)
7. Банки стеклянные (или колбы) для дистиллированной воды емкостью 1 - 2 л
8. Набор стеклянных мерных пипеток (от 1 до 10 мл)
9. Химические стаканы
10. Покровные стекла
11. Ситечки с ячеей 1 х 1 мм
12. Термостат
13. Холодильник
3.2.11.4.1. В специальных целях при необходимости выделения личинок из тканей гидробионтов (для дифференциации видовой принадлежности, получения материала для контрольной биологической пробы, при низкой интенсивности инвазии или для ее подсчета) используется метод переваривания. Он также более эффективен при исследовании продуктов переработки гидробионтов (фарша, пресервов). В основном используется для выделения метацеркарий трематод, реже личинок нематод.
3.2.11.4.2. Метод основан на том, что в кислой среде метацеркарий освобождаются от наружной оболочки, а окружающая их мышечная ткань переваривается в искусственном желудочном соке.
3.2.11.4.3. Приготовление искусственного желудочного сока. На 1000 мл дистиллированной воды (при ее отсутствии можно использовать кипяченую остывшую до температуры 37 - 38°С водопроводную воду) добавляют 7 г пепсина, 9,0 г поваренной соли (NaCl) и 10 мл концентрированной соляной кислоты (НCl).
3.2.11.4.4. Для выделения метацеркарий трематод берут подкожную мышечную ткань (до 0,5 см), а мелких личинок нематод - всю мышечную ткань. Ее отделяют от кожи, измельчают ножом или в мясорубке (при выделении личинок нанофиетуса используют дополнительно и почки). Затем ее заливают в соотношении 1:10 приготовленным искусственным желудочным соком (1 часть фарша и 10 частей искусственного желудочного сока). Пробу помещают в термостат на 3 ч при температуре 36 - 37°С, после чего содержимое фильтруют в стеклянные цилиндры через металлический фильтр с размером ячеек 1 х 1 мм или однослойный бинт. Через 15 - 20 мин верхний слой желудочного сока с переваренной мышечной тканью сливают, а осадок переносят в чашку Петри (или глубокое часовое стекло) и микроскопируют. Для лучшего отделения личинок в чашку Петри наливают физиологический раствор, делают несколько круговых движений, в результате которых метацеркарии концентрируются в центре чашки Петри (часового стекла), а излишки физраствора с остатками мышечной ткани удаляют пипеткой. Процедуру повторяют до полного исчезновения остатков не переваренной мышечной ткани.
Эффективность метода переваривания, в сравнении с компрессорным, в 1,5 раза выше. Метацеркарии трематод, выделенные этим способом из свежей рыбы, сохраняют свою структуру и жизнеспособность в физрастворе в течение 10 - 24 ч при температуре 20 - 25°С и 5 - 7 дней при температуре 1 - 4°С и могут быть использованы для биопробы.
3.2.12. Заранее подготовленную чешую (2.1.6) исследуют с использованием микроскопа МБС (увеличение 16 - 48 раз, окуляр 8х, 12х, объектив 2х, 4х) в небольшом количестве воды на наличие метацеркарий Metagonimus yokogawai, Metagonimus katsuradai.
3.3. Методика неполного гельминтологического исследования земноводных и пресмыкающихся
3.3.1. Процедура и порядок исследования земноводных и пресмыкающихся аналогичны таковым при инспектировании рыбы. Исследуют полость тела, органы и ткани, включая мускулатуру.
3.4. Методика неполного гельминтологического исследования беспозвоночных
3.4.1. Двустворчатые моллюски.
3.4.1.1. Для раскрытия раковины тонкий нож или скальпель вводят между створками и разрезают мускул-замыкатель. Из открытой раковины, надрезав мантию в передней ее части, сливают мантийную жидкость. Между одной из створок и прилегающей к ней мантийной складкой вводится плоская ручка скальпеля. Двигая ее по краю створки вперед и назад, сначала отделяют край мантии, прикрепленный к створке, затем передний и задний мускулы-замыкатели (аддукторы). На следующем этапе отделяют мантию и аддукторы от другой створки, после чего раковина легко удаляется. У гребешков и устриц аддуктор один и находится в середине тела, несколько ближе к заднему краю.
3.4.1.2. Вынутое из раковины тело моллюска помещают в кювету (или чашку Петри) с водой. Осматривают мантию и просвечивающие в спинной части тела через полупрозрачную кожу - внутренние органы: печень, лежащую непосредственно позади переднего аддуктора или на спинной стороне над аддуктором (у гребешков и устриц), перикардий и граничащие с задним аддуктором почки. Обнаруженных личинок нематод извлекают препаровальной иглой.
3.4.1.3. Мантийные складки отрезают и просматривают на просвет (п.3.2.11.2) или компрессорно (п.3.2.11.3). Затем отрезают и осматривают жабры.
3.4.1.4. Отпрепаровывают гонады, залегающие в спинной части ноги. Они расчленены и слагаются из многочисленных мелких долек, окружающих петлю кишечника. Гонады исследуют компрессорным способом. Здесь наиболее вероятно обнаружение личинок Echinocephalus sinensis и Sulcascaris sulcata. Затем выделяют пищеварительную систему и исследуют таким же образом.
3.4.1.5. Аддукторы и ногу исследуют так же, как мускулатуру у рыб (п.3.2.11). Аддуктор гребешков - место наиболее вероятной локализации Sulcascaris sulcata.
3.4.1.6. Выявленных личинок помещают в чашку Петри или часовое стекло с физиологическим раствором для дальнейшего определения вида паразита.
3.4.2. Головоногие моллюски. У кальмаров и каракатиц разрезается мантия на брюшной стороне. Разрез делают ножницами или скальпелем по срединной линии, начиная от края мантии, до основания плавника. При этом стараются не повредить чернильный мешок. У осьминогов, кроме того, разрезают мускулистую продольную перегородку, открывая доступ в мантийную полость. Отгибают стенки мантии и осматривают внутренности. Последовательно отделяют жабры, гонады, пищеварительную систему. Внутренние органы исследуют компрессорно. Особое внимание обращают на гонаду, где возможно обнаружение личинок нематод рода Anisakis. Освобожденную от внутренних органов мантию исследуют аналогично мышечной ткани рыб - на просвет (п.3.2.11.2) или методом параллельных разрезов (п.3.2.11.1). На внутренней стороне мантии, в пленках встречаются личинки нематод родов Anisakis и Contracaecum.
3.4.3. Ракообразные.
3.4.3.1. При инспектировании пресноводных крабов и раков на наличие метацеркарий парагонимид в первую очередь исследуют мышцы грудного отдела и сердце, как места наиболее вероятной локализации личинок (до 90% случаев). Для этого у ракообразных ножницами срезают карапакс, затем с помощью скальпеля вырезают мышцы грудного отдела. Используя компрессорный метод (п.3.2.11.3), микроскопируют при увеличении в 16 - 48 раз (окуляр 8х, 12х, объектив 2х, 4х). Из задней части грудного отдела вычленяют сердце и исследуют таким же образом.
3.4.3.2. С боковых сторон головогруди срезают жабры и исследуют компрессорно в небольшом количестве воды.
3.4.3.3. Для выделения мяса из абдомена, последний отрезают от груди и ножницами разрезают панцирь от верхнего края "шейки" до тельсона (хвостового веера). Конечности (у крабов и раков) разрезают на части (поперек) вблизи кожистых суставов, одновременно разрезая хитиновую пластинку, прикрепленную к суставу. Панцирные трубки разрезают вдоль и извлекают мясо. Клешню разбивают резким и сильным ударом деревянного молотка. Всю мышечную ткань просматривают в компрессории.
3.4.3.4. Всю выделенную мышечную ткань можно исследовать методом переваривания в искусственном желудочном соке (п.3.2.11.4).
4. Методы дифференциальной диагностики личинок гельминтов
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Химические реактивы: физиологический раствор; жидкость для просветления нематод (1 часть дистиллированной воды + 1 часть концентрированной молочной кислоты + 1 часть глицерина)
2. Предметные стекла
3. Большие предметные стекла (6 - 8 х 12 - 15 см, толщиной 2 - 4 мм)
4. Покровные стекла
5. Чашки Петри
6. Часовые стекла
7. Пинцеты разных размеров (анатомические, хирургические, глазные)
8. Препаровальные иглы разной толщины
9. Пипетки стеклянные (пастеровские)
10. Резиновые груши
11. Бинокулярный микроскоп типа МБС
12. Лупа
13. Осветитель для бинокуляра любой марки
14. Световой микроскоп типа Биолам, Бимам
15. Осветитель к микроскопу любой марки
16. Окуляр-микрометр для светового микроскопа
17. Окуляр-микрометр для бинокулярного микроскопа
18. Объект-микрометр
Для определения видовой принадлежности личинок гельминтов необходимо исследование с применением оптических средств.
Извлеченных из рыб, моллюсков, ракообразных, земноводных и пресмыкающихся плероцеркоидов, личинок нематод, скребней, отделенных от тканей метацеркарий или включения, которые могут быть приняты за паразитов (в том числе инцистированных или инкапсулированных) помещают на предметное стекло в каплю воды или физиологического раствора, накрывают покровным стеклом и исследуют сначала под малым (в 56 - 150 раза, окуляр 7х, 10х, объектив 8х, 10х, бинокулярная насадка 1,5х), а затем под большим (в 140 - 600 раз, окуляр 7х, 10х, объектив 20х, 40х, бинокулярная насадка 1,5х) увеличением микроскопа.
Дифференциальная диагностика нематод требует предварительного выдерживания личинок в просветляющей жидкости. Крупных личинок с плотной кутикулой просветляют до двух - трех дней (личинки сем. Anisakidae), мелких с тонкой кутикулой - не менее 3 - 5 ч.
Для проведения необходимых измерений личинок, отдельных их частей или органов следует пользоваться окуляром-микрометром (окуляром, с установленной в его фокальной плоскости прозрачной пластинкой с линейкой длиной в 1 см с делениями, соответствующими 0,1 мм). Цена деления шкалы при использовании разных объективов меняется и вычисляется с помощью объект-микрометра - препарата, представляющего собой нанесенную на стекло шкалу с ценой деления 0,01 мм. Если m делений изображения объект-микрометра по величине соответствует n делениям окулярной шкалы, точное значение увеличения объектива (b) будет равно b = 10 п/т. При измерении объектов наблюдают, в пределах скольких делений n окулярной шкалы располагается изображение измеряемого элемента, и размер его (а) подсчитывают по формуле: а = 0,1 n/m.
В случае, если исследователь не может установить видовую принадлежность личинок гельминтов, паразитов следует поместить в фиксатор (см. раздел 6) и направить на консультацию в базовые (головные в системах сертификации или СНЛК*(1) испытательные лаборатории (центры), аккредитованные в установленном порядке или в профильные научно-исследовательские институты.
4.1. Дифференциальная диагностика личинок цестод
4.1.1. Цестоды, заражение человека которыми происходит при употреблении в пищу необеззараженной рыбной продукции, относятся к семейству Diphyllobothriidae.
В пресноводных, проходных и морских рыбах, а также земноводных и пресмыкающихся паразитирует личиночная стадия лентецов - плероцеркоид, имеющий вид нерасчлененного мягкого червя (складки на теле могут создавать вид ложной сегментации), слегка уплощенного в дорзо-вентральном направлении, молочно-белого или кремового цвета. Головной конец (сколекс) не имеет крючьев или других подобных образований, но имеет две щелевидные присоски (ботрии) - органы прикрепления. Длина тела личинки колеблется от 1 - 2 мм до 10 и более сантиметров. Установить наличие у личинки сколекса с ботриями необходимо, так как за плероцеркоида могут быть приняты их фрагменты или фрагменты других цестод.
У живых, только что извлеченных из свежей рыбы плероцеркоидов, сколекс втянут (инвагинирован) или частично втянут, но при помещении их в теплую воду сколекс вытягивается, то сокращаясь, то расслабляясь. На вытянутом сколексе становятся заметными ботрии.
4.1.2. Половозрелые формы гельминтов p.Diphyllobothrium встречаются в кишечнике морских и наземных млекопитающих, рыбоядных птиц. У человека могут паразитировать Diphyllobothrium latum, Diphyllobothrium dendriticum и Diphyllobothrium luxi (D. klebanovskii). Diphyllobothrium ditremum - паразит рыбоядных птиц - также может приживаться у человека, но половой зрелости не достигает и яиц не выделяет, медицинское значение его невелико. Отмечаются случаи паразитирования у человека лентецов рода Dyplogonoporus (D.fukuokaensis зарегистрирован у человека в Японии), заражение которыми происходит от необеззараженных морских и проходных рыб. Плероцеркоиды рода Dyplogonoporus морфологически сходны с таковыми рода Diphyllobothrium.
Случаи спарганоза человека, вызываемого Spirometra erinaceieuropaei, встречаются спорадически в России и странах Юго-Восточной Азии, реже на других континентах (в Австралии и Америке распространены другие виды Spirometra). Плероцеркоиды (спарганумы) рода Spirometra у человека не развиваются до взрослой стадии. Их окончательные хозяева - домашние и дикие плотоядные (сем. Собачьи, Кошачьи).
4.1.3. При определении видов плероцеркоидов используют морфологические признаки, характер локализации личинок (капсул с личинками), состав дополнительных хозяев, географическое распространение (см. табл.1, рис.1 - 5).
Кроме того, при исследовании свежей и охлажденной рыбы имеет значение такой признак, как срок выживания личинок в пресной воде. Так, развитые плероцеркоиды Diphyllobothrium latum и Diphyllobothrium luxi(D. klebanovskii) выживают в воде около суток и более, Diphyllobothrium dendriticum - до 2,5 ч (мелкие - не более 1 ч), а Diphyllobothrium ditremum (по локализации инкапсулированных личинок сходного с Diphyllobothrium dendriticum) - не более 10 мин.
Спарганумы Spirometra erinacei-europaei с неповрежденным тегументом выживают в водопроводной воде более суток, в физиологическом растворе - до 8 - 13 дней.
4.2. Дифференциальная диагностика метацеркарий трематод
4.2.1. Трематоды - наиболее распространенные паразиты морских и пресноводных рыб. Подавляющее их большинство не опасно для здоровья человека. Метацеркарии трематод - возбудители заболеваний человека - относятся к 5 семействам: Opisthorchidae, Heterophyidae, Nanophyetidae, Echinostomatidae и Paragonimidae.
Таблица 1
Дифференциальные признаки плероцеркоидов сем. Diphyllobothriidaе, опасных для здоровья человека
-----------------T--------------------T-----------------T------------T-------------T-----------------------¬ ¦ Вид гельминта ¦ Географическое ¦ Дополнительные ¦Локализация ¦ Наличие или ¦ Строение и размеры ¦ ¦ ¦ распространение ¦ хозяева (рыбы, ¦ в теле ¦ отсутствие ¦ плероцеркоида ¦ ¦ ¦ ¦ земноводные, ¦ хозяина ¦ капсул ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ пресмыкающиеся) ¦ ¦ ¦ ¦ +----------------+--------------------+-----------------+------------+-------------+-----------------------+ ¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ +----------------+--------------------+-----------------+------------+-------------+-----------------------+ ¦Diphyllobotrium ¦Пресные водоемы и¦Щука, налим,¦Полость ¦Обычно без¦Личинки ¦ ¦latum (Лентец¦опресненные участки¦окунь ¦тела, икра,¦капсул ¦беловато-молочного ¦ ¦широкий) ¦морей севера Евразии¦обыкновенный, ¦внутренние ¦ ¦цвета, длиной от¦ ¦ ¦(РФ, Латвия, Литва,¦ерш, сом, судак¦органы, ¦ ¦нескольких мм до 7 см.¦ ¦ ¦Эстония, Финляндия,¦обыкновенный, ¦мышцы ¦ ¦На теле и сколексе нет¦ ¦ ¦Дания, Швеция,¦берш, окунь¦ ¦ ¦заметных под световым¦ ¦ ¦Польша, Швейцария),¦желтый, судаки¦ ¦ ¦микроскопом ворсинок.¦ ¦ ¦Сев. Италии и¦светлоперый и¦ ¦ ¦Характерно наличие на¦ ¦ ¦Америки (США,¦канадский ¦ ¦ ¦теле личинки глубоких¦ ¦ ¦Канада); бассейны¦ ¦ ¦ ¦складок, которые¦ ¦ ¦Волги, Дуная,¦ ¦ ¦ ¦частично сохраняются и¦ ¦ ¦Днепра, сибирских¦ ¦ ¦ ¦после расслабления в¦ ¦ ¦рек ¦ ¦ ¦ ¦воде. Сколекс с двумя¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦щелевидными ботриями¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦обычно втянут ¦ +----------------+--------------------+-----------------+------------+-------------+-----------------------+ ¦D. dendriticum¦Пресные водоемы¦Пелядь, омуль,¦На стенках и¦Обычно в¦Личинки светлого¦ ¦(Лентец чаечный)¦севера Европы (РФ,¦сиг, голец,¦в толще¦капсулах ¦кремового цвета. Длина¦ ¦ ¦Литва, Латвия,¦семга, лососи¦стенок ¦диаметром 2,2¦1 - 10 см, иногда до 20¦ ¦ ¦Эстония, Финляндия,¦(Кларка, ¦пищевода и¦- 11 мм. При¦см. После расслабления¦ ¦ ¦Норвегия, Швеция,¦стальноголовый), ¦желудка, ¦локализации в¦в воде складчатость¦ ¦ ¦Польша, Германия,¦муксун, чир,¦реже на¦икре, как¦слабо выражена. Сколекс¦ ¦ ¦Ирландия, ¦хариусы ¦других ¦правило, без¦четко отграничен от¦ ¦ ¦Великобритания) и¦(сибирский и¦органах и в¦капсул. У¦тела. Он обычно втянут¦ ¦ ¦Америки (Канада,¦европейский), ¦мышечной ¦некоторых ¦или частично вытянут,¦ ¦ ¦США); пресные¦тугун, кумжа,¦ткани ¦видов ¦при этом участки тела¦ ¦ ¦водоемы Сибири (РФ),¦таймень, ленок,¦ ¦(например, ¦вокруг него образуют¦ ¦ ¦Дальнего Востока¦ряпушка сибирская¦ ¦сибирская ¦подобие "плечиков".¦ ¦ ¦(Сахалин), оз.¦и ¦ ¦ряпушка) ¦Края ботридиальных¦ ¦ ¦Иссык-Куль ¦североамериканс- ¦ ¦наряду с¦листков выглядят¦ ¦ ¦ ¦кая, палия¦ ¦личинками в¦фестончатыми. У¦ ¦ ¦ ¦обыкновенная и¦ ¦капсулах, ¦расслабленных личинок¦ ¦ ¦ ¦американская, ¦ ¦встречаются и¦сколекс приобретает¦ ¦ ¦ ¦кижуч, корюшка,¦ ¦свободно ¦овально-миндалевидную ¦ ¦ ¦ ¦османы ¦ ¦залегающие в¦форму, ботридиальные¦ ¦ ¦ ¦(алтайский, ¦ ¦полости тела¦щели раскрываются¦ ¦ ¦ ¦голый), налим,¦ ¦плероцеркоиды¦широко. Тело покрыто¦ ¦ ¦ ¦широколобки ¦ ¦ ¦ворсинками длиной 7 -¦ ¦ ¦ ¦(большеголовая, ¦ ¦ ¦11 мкм, которые на¦ ¦ ¦ ¦жирная, ¦ ¦ ¦сколексе едва заметны ¦ ¦ ¦ ¦длиннорылая) ¦ ¦ ¦ ¦ +----------------+--------------------+-----------------+------------+-------------+-----------------------+ ¦D. luxi ¦Д. Восток, Чукотка,¦Кета, горбуша,¦Вся ¦Овальные ¦Плероцеркоиды ¦ ¦(D. ¦моря Тихого океана и¦сима, кунджа,¦дорсальная ¦капсулы с¦морфологически сходны с¦ ¦klebanovskii) ¦бассейны рек,¦сахалинский ¦мускулатура ¦прозрачными ¦личинками D. latum, но¦ ¦(Лентец ¦впадающих в них, в¦таймень ¦ ¦стенками (4 -¦в отличие от них обычно¦ ¦дальневосточный)¦границах ареала¦ ¦ ¦6 х 2 - 5¦инкапсулированы. Поры¦ ¦ ¦дополнительных ¦ ¦ ¦мм). В¦фронтальных желез¦ ¦ ¦хозяев гельминта, за¦ ¦ ¦мускулатуре ¦располагаются на¦ ¦ ¦исключением северной¦ ¦ ¦горбуши ¦сколексе и теле личинки¦ ¦ ¦части зап.¦ ¦ ¦раннего хода¦ ¦ ¦ ¦Приохотья. Ареал D.¦ ¦ ¦и симы¦ ¦ ¦ ¦Ilixi не¦ ¦ ¦личинки ¦ ¦ ¦ ¦пересекается с¦ ¦ ¦залегают без¦ ¦ ¦ ¦ареалом D. latum ¦ ¦ ¦капсул или¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦находятся на¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦разных ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦стадиях ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦инкапсуляции ¦ ¦ +----------------+--------------------+-----------------+------------+-------------+-----------------------+ ¦D. dltremum ¦Пресные водоемы¦Семга, форель,¦Серозные ¦В капсулах ¦Плероцеркоиды белого¦ ¦ ¦севера Европы, Азии¦арктический ¦покровы ¦ ¦цвета, длиной 6 - 12¦ ¦ ¦и Америки (на юг до¦голец, палия¦пищеварите- ¦ ¦мм, после расслабления¦ ¦ ¦40-50° с.ш.) ¦американская, ¦льного ¦ ¦и гибели в воде тело¦ ¦ ¦ ¦ряпушки ¦тракта ¦ ¦равномерно вытянутое,¦ ¦ ¦ ¦(сибирская, ¦(пищевод, ¦ ¦палочковидное, без¦ ¦ ¦ ¦европейская), ¦желудок, ¦ ¦складок, сколекс¦ ¦ ¦ ¦омуль, сиг¦пилорические¦ ¦отграничен от тела.¦ ¦ ¦ ¦обыкновенный, ¦придатки), ¦ ¦Тело и сколекс покрыты¦ ¦ ¦ ¦пелядь, тугун,¦реже на¦ ¦ворсинками длиной 0,01¦ ¦ ¦ ¦хариусы ¦других ¦ ¦- 0,03 мм. Выживает в¦ ¦ ¦ ¦(сибирский, ¦внутренних ¦ ¦воде не более 10 мин ¦ ¦ ¦ ¦европейский), ¦органах ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦корюшки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(европейскаязуба-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦стая), налим,¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦колюшки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(трехиглая и¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦девятииглая) ¦ ¦ ¦ ¦ +----------------+--------------------+-----------------+------------+-------------+-----------------------+ ¦Pyramicocephalus¦Субарктическая и¦Тресковые ¦Полость тела¦Без капсул ¦Морфологически сходны с¦ ¦phocarum ¦арктическая зоны¦(треска, минтай,¦и сероза¦ ¦личинками р.¦ ¦ ¦Мирового океана ¦сайка, навага,¦внутренних ¦ ¦Diphyllobothrilim. ¦ ¦ ¦ ¦пикша); ¦органов ¦ ¦Длина тела 8 - 25 мм,¦ ¦ ¦ ¦скорпеновые ¦(печень, ¦ ¦до 40 мм, ширина 1 - 3¦ ¦ ¦ ¦(окунь-клювач): ¦пилорические¦ ¦мм. Обычно тело в¦ ¦ ¦ ¦рогатковые ¦придатки ¦ ¦складках. Сколекс¦ ¦ ¦ ¦(рогатка, ¦желудка); у¦ ¦относительно массивный,¦ ¦ ¦ ¦керчак), ¦минтая и¦ ¦булавовидно-стреловид- ¦ ¦ ¦ ¦пинагоровые ¦наваги ¦ ¦ной формы (размеры¦ ¦ ¦ ¦(пинагор); ¦встречается ¦ ¦сколекса 2 х 1 мм) ¦ ¦ ¦ ¦камбаловые ¦в скелетной¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(камбала-ершоват-¦мускулатуре ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ка, камбала-ерш,¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦камбала морская),¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦палтус ¦ ¦ ¦ ¦ +----------------+--------------------+-----------------+------------+-------------+-----------------------+ ¦Spirometra ¦Европа и Азия. В РФ¦Земноводные ¦У лягушек -¦Обычно без¦Личинки молочно-белого¦ ¦erinacei-europae¦чаще всего¦(лягушка озерная,¦в мышцах¦капсул, у¦цвета. Длина от 5 мм до¦ ¦i ¦встречается в дельте¦прудовая): ¦(чаще в¦змей иногда в¦30 см и более, в¦ ¦ ¦Волги, Приморье, на¦Пресмыкающиеся ¦бедрах), в¦тонких ¦зависимости от возраста¦ ¦ ¦Сахалине ¦(уж водяной, уж¦полости ¦капсулах на¦и степени сокращения¦ ¦ ¦ ¦обыкновенный, ¦тела, между¦кишечнике или¦личинки. Выделенный из¦ ¦ ¦ ¦полозы) ¦петлями ¦подкожно ¦хозяина плероцеркоид¦ ¦ ¦ ¦ ¦кишечника, ¦ ¦характеризуется ¦ ¦ ¦ ¦ ¦во ¦ ¦присутствием на теле¦ ¦ ¦ ¦ ¦внутренних ¦ ¦узлов сокращения,¦ ¦ ¦ ¦ ¦органах. У¦ ¦чередующихся с¦ ¦ ¦ ¦ ¦змей - в¦ ¦расслабленными ¦ ¦ ¦ ¦ ¦подкожной ¦ ¦участками тела. В¦ ¦ ¦ ¦ ¦клетчатке, ¦ ¦сокращенных участках¦ ¦ ¦ ¦ ¦полости ¦ ¦тело широкое и плоское,¦ ¦ ¦ ¦ ¦тела, ¦ ¦с глубокими поперечными¦ ¦ ¦ ¦ ¦мускулатуре,¦ ¦складками, в¦ ¦ ¦ ¦ ¦межмышечной ¦ ¦расслабленных участках¦ ¦ ¦ ¦ ¦соединитель-¦ ¦- узкое и лишенное¦ ¦ ¦ ¦ ¦ной ткани ¦ ¦складчатости. Передний¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦конец тела обычно¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦сокращен сильнее других¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦участков. Сколекс¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦небольшой, от тела не¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦обособлен, втянут¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦внутрь и обычно¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦повернут в сторону.¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Ботрии значительно¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦короче, чем у других¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦дифиллоботриид (0,2 -¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,4 мм) ¦ L----------------+--------------------+-----------------+------------+-------------+------------------------
При определении семейства и вида трематод в первую очередь ориентируются на размер и форму цисты, характер ее оболочек; положение личинки в цисте (подвижность*(2) и ее строение, в т. ч. размер, цвет и форму экскреторного пузыря; круг дополнительных хозяев и локализацию в теле рыбы или ракообразных (см. табл.2, 3). Все опасные для здоровья человека метацеркарии, встречающиеся в рыбе, заключены в цисты. Размеры цист не превышают 1 мм. Поэтому обнаруженные в рыбе более крупные или свободные, не инцистированные метацеркарии не нуждаются в дальнейшем исследовании.
Метацеркарии сем. Paragonimidae могут быть как в цистах, так и свободными.
Определение трематод до вида по строению цисты возможно только при достаточном навыке исследователя. В противном случае для уточнения видовой принадлежности трематод целесообразно извлечь метацеркарию из цисты.
Тщательно отделенную от окружающих тканей цисту помещают на стекло в каплю воды или физиологического раствора. Оболочку ее разрывают тонкими иглами (лучше энтомологическими булавками N 00) или легким надавливанием покровного стекла. Если при этом личинка сама не выходит из цисты, то ее вымывают водой из пипетки. Выход метацеркарий из цист можно стимулировать, воздействуя дуоденальным содержимым человека или животных, или трипсином (см. п.5.3.1).
По морфологии выделенных из цист личинок во многом можно судить о строении взрослых трематод. Ротовое отверстие у метацеркарии трематод всех пяти семейств расположено на переднем конце, окружено ротовой присоской. Передний конец тела не несет каких-либо выростов или боковых присосок. Брюшная присоска более или менее выражена. Орган Брандеса позади брюшной присоски отсутствует. Кишечник с бифуркацией. Ветви кишечника без ответвлений.
Таблица 2
Дифференциальные признаки метацеркарий трематод сем. Opisthordidae, Heterophyidae, Nanophyetidae u Echinostomatidae, опасные для здоровья человека
---------------T-----------T---------------T-----------T-------------T----------T------------T-------------¬ ¦Вид гельминта ¦Географиче-¦ Виды рыб - ¦Локализация¦Размер (в мм)¦Характери-¦Положение и ¦ Строение и ¦ ¦ ¦ ское ¦дополнительных ¦в теле рыбы¦ и ¦ стика ¦подвижность ¦ размеры ¦ ¦ ¦распростра-¦ хозяев ¦ ¦характеристи-¦экскретор-¦ личинки ¦освобожденной¦ ¦ ¦ нение ¦ ¦ ¦ ка цисты ¦ ного ¦ ¦ от цисты ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ пузыря ¦ ¦ личинки (в ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ мм) ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ б ¦ 7 ¦ 8 ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Opisthorchis ¦Пресные ¦Язь, елец,¦Верхний ¦0,17 - 0,25 x¦Крупный, ¦Метацеркария¦0,44 - 1,36 х¦ ¦felinеus ¦водоемы ¦линь, ¦слой ¦0,21 - 0,33¦до 1/3¦лежит в¦0,15 - 0,30¦ ¦ ¦Европы; ¦красноперка, ¦мышечной ¦овальная, ¦части ¦цисте в¦ОП* - 0,07 -¦ ¦ ¦бассейны ¦плотва, ¦ткани (2 -¦реже ¦тела. В¦изогнутом ¦0,1; БП** -¦ ¦ ¦рек Обь,¦верховка, ¦4 мм) и¦округлая. ¦лучах ¦положении, ¦0,09 - 0,14.¦ ¦ ¦Иртыш, ¦голавль, лещ,¦подкожная ¦Оболочка ¦проходяще-¦которое ¦Тело личинки¦ ¦ ¦Енисей, ¦чехонь, синец,¦клетчатка в¦двуслойная, ¦го света в¦меняется ¦не ¦ ¦ ¦реки ¦гольяны ¦области ¦тонкая, ¦виде ¦из-за почти¦пигментирова-¦ ¦ ¦Казахстана:¦обыкновенный и¦спины, реже¦прозрачная. ¦большого ¦постоянного ¦но, покрыто¦ ¦ ¦Уил, ¦Чекановского, ¦в ¦Внутренняя по¦темного ¦энергичного ¦шипиками до¦ ¦ ¦Сары-Су, ¦подуст, ¦плавниках, ¦всему ¦пятна ¦движения ¦уровня БП.¦ ¦ ¦Байконур, ¦белоглазка, ¦на жабрах,¦периметру ¦ ¦личинки ¦Пищевод ¦ ¦ ¦Уил-Жилан- ¦уклея, густера,¦в чешуе ¦равномерно ¦ ¦ ¦длинный (в 2¦ ¦ ¦шик, Иргиз,¦пескарь, ¦ ¦прилегает к¦ ¦ ¦раза длиннее¦ ¦ ¦Тургай, ¦щиповка, жерех ¦ ¦наружной ¦ ¦ ¦фаринкса). ¦ ¦ ¦Нура, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Развилка ¦ ¦ ¦Шидерты, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦кишечника ¦ ¦ ¦озера ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦лежит на¦ ¦ ¦Кургальджи ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦равном ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦расстоянии от¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦переднего ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦конца тела и¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦БП. Зачатки¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦семенников ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦лежат ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦наискось один¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦к другому по¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦краям ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦экскреторного¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦пузыря ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Metorchis ¦Пресные ¦-"- ¦Верхний ¦0,12 - 0,16 x¦До 1/4¦Движения ¦0,27 - 0,33 х¦ ¦bills ¦водоемы ¦ ¦слой ¦0,19 - 0,22¦объема ¦замедленные ¦0,05 - 0,1.¦ ¦ ¦Калинингра-¦ ¦мышечной ¦овальная. ¦задней ¦ ¦РП = БП -¦ ¦ ¦дской и¦ ¦ткани (2- 4¦Оболочка ¦части тела¦ ¦0,05, ¦ ¦ ¦Московской ¦ ¦мм) и¦тонкостенная ¦черный, ¦ ¦расположена ¦ ¦ ¦областей, ¦ ¦подкожная ¦двуслойная. ¦округлый ¦ ¦несколько ¦ ¦ ¦Украины, ¦ ¦клетчатка в¦Между ¦ ¦ ¦кзади от¦ ¦ ¦Зап. ¦ ¦области ¦оболочками ¦ ¦ ¦середины ¦ ¦ ¦Сибири, ¦ ¦спины ¦цисты заметны¦ ¦ ¦тела. Тело не¦ ¦ ¦Казахстана.¦ ¦ ¦промежутки ¦ ¦ ¦пигментирова-¦ ¦ ¦Сев. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦но. Покрыто¦ ¦ ¦Кавказа, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦шипиками ¦ ¦ ¦бассейн ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦треугольной ¦ ¦ ¦Волги ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦формы до¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦уровня ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦заднего края¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦БП. Пищевод¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦очень ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦короткий ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Pseudomphist- ¦Пресные ¦Язь, плотва,¦ -"- ¦0,39 - 0,45 х¦Крупный ¦Метацеркария¦1,28 - 1,54 х¦ ¦omim truncatum¦водоемы ¦густера, лещ,¦ ¦0,40 - 0,54.¦черный ¦сложена в¦0,34 - 0,40.¦ ¦ ¦средней ¦линь, ¦ ¦Округлая или¦округлый ¦средней ¦БП, как¦ ¦ ¦полосы ¦красноперка, ¦ ¦слегка ¦почковид- ¦части тела в¦правило, ¦ ¦ ¦России, ¦вобла, синец ¦ ¦овальная. ¦ный, ¦вентральном ¦крупнее РП.¦ ¦ ¦Поволжья, ¦ ¦ ¦Оболочка ¦занимает ¦положении, ¦Тело покрыто¦ ¦ ¦Казахстана.¦ ¦ ¦тонкая ¦не более¦лежит в¦шипиками, ¦ ¦ ¦Зап. ¦ ¦ ¦прозрачная ¦1/3 тела ¦цисте ¦немного не¦ ¦ ¦Сибири, ¦ ¦ ¦двуслойная. ¦ ¦свободно. ¦доходящими до¦ ¦ ¦бассейны ¦ ¦ ¦Слои ¦ ¦Движения ¦заднего конца¦ ¦ ¦рек, ¦ ¦ ¦равномерно ¦ ¦редкие ¦тела. Пищевод¦ ¦ ¦впадающих в¦ ¦ ¦прилегают ¦ ¦ ¦короткий, ¦ ¦ ¦Черное море¦ ¦ ¦друг к другу ¦ ¦ ¦такой же¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦длины, как¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦фаринкс. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Развилка ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦кишечника ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦лежит много¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦выше, чем у¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦O. felineus,¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦приближена к¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦РП. Зачатки¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦семенников ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦лежат почти¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦на одном¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦уровне ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Clonorchis ¦Пресные ¦Карповые ¦ -"- ¦0,13 - 0,15 х¦Черный ¦Слабые ¦0,3 - 0,4 х¦ ¦sinensis ¦водоемы ¦китайского ¦ ¦0,15 - 0,18¦грушевид- ¦движения ¦0,12 - 0,14.¦ ¦ ¦юго-восточ-¦ихтиокомплекса ¦ ¦шаровидной ¦ный, до¦ ¦РП - 0,05. БП¦ ¦ ¦ных и¦(более 70¦ ¦формы. ¦1/4 части¦ ¦- 0,06. Тело¦ ¦ ¦центральных¦видов): ¦ ¦Оболочка ¦тела. ¦ ¦желто-корич- ¦ ¦ ¦районов ¦корейские ¦ ¦двуслойная, ¦Заполнен ¦ ¦невой ¦ ¦ ¦стран ¦косатки, ¦ ¦внутренняя ¦плотно ¦ ¦пигментации. ¦ ¦ ¦Дальнего ¦японская ¦ ¦равномерно ¦расположе-¦ ¦Шипики по¦ ¦ ¦Востока ¦оризия, ¦ ¦прилегает к¦нными ¦ ¦всему телу,¦ ¦ ¦(Япония, ¦риногобиус, ¦ ¦наружной ¦гранулами ¦ ¦за ¦ ¦ ¦Китай, ¦элеотрис, ¦ ¦ ¦(до 10 мк)¦ ¦исключением ¦ ¦ ¦Корея, ¦тиляпия, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦самой задней¦ ¦ ¦Вьетнам). В¦малоротая ¦ ¦ ¦ ¦ ¦части. ¦ ¦ ¦России ¦корюшка, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Пищевод ¦ ¦ ¦бассейны ¦сельдь-илиша, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦длинный, ¦ ¦ ¦Амура и¦змееголов ¦ ¦ ¦ ¦ ¦разветвляется¦ ¦ ¦Уссури ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦на уровне¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦середины ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦расстояния ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦между глоткой¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦и передним¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦краем БП.¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Имеется 14¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦сенсорных ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦папилл по¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦краям тела,¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦12 вокруг РП.¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦9 вокруг БП ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Apophallus ¦Бассейны ¦Карповые, ¦Ткани ¦0,20 - 0,29 х¦Y-образной¦ ¦0,50 - 0,58 х¦ ¦muehlingi ¦Балтийского¦окуневые: щука,¦плавников, ¦0,14 - 0,20,¦формы, ¦ ¦0,10 - 0,12.¦ ¦ ¦, Черного и¦судак ¦жабры ¦эллипсовидной¦задний ¦ ¦Пищевод ¦ ¦ ¦Каспийского¦ ¦ ¦или ¦конец ¦ ¦доходит до¦ ¦ ¦морей: реки¦ ¦ ¦шаровидной ¦S-образно ¦ ¦половины ¦ ¦ ¦Карпат и¦ ¦ ¦формы. ¦изогнут ¦ ¦длины тела.¦ ¦ ¦Закарпатья ¦ ¦ ¦Пигментирова-¦ ¦ ¦Кутикула ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ны в виде¦ ¦ ¦покрыта ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦маленьких ¦ ¦ ¦мелкими ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦черных точек ¦ ¦ ¦шипиками-че- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦шуйками. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Зачатки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦семенников ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦лежат один за¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦другим, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦наискось по¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦сторонам ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦выделительно-¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦го пузыря ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Rossicotrema ¦Реки. ¦Окуневые, ¦Ткани ¦0,26 - 0,34 х¦Y-образной¦ ¦0,49 - 0,53 х¦ ¦donicum ¦впадающие в¦атериновые, ¦плавников и¦0,20 - 0,23¦формы ¦ ¦0,13 - 0,15.¦ ¦ ¦Черное ¦реже карповые ¦хвоста, ¦эллипсовидной¦ ¦ ¦РП - 0,035 -¦ ¦ ¦море, ¦ ¦реже в¦формы. ¦ ¦ ¦0,045. БП¦ ¦ ¦лиманы ¦ ¦подкожной ¦Оболочка ¦ ¦ ¦меньше РП.¦ ¦ ¦Азовского ¦ ¦клетчатке и¦двуслойная, ¦ ¦ ¦Пищевод 0,05¦ ¦ ¦моря, ¦ ¦мышцах ¦окружена ¦ ¦ ¦- 0,10 (не¦ ¦ ¦низовье ¦ ¦ ¦кольцом ¦ ¦ ¦более 1/4¦ ¦ ¦Волги. ¦ ¦ ¦черного ¦ ¦ ¦длины тела).¦ ¦ ¦р.Тиса ¦ ¦ ¦пигмента ¦ ¦ ¦Зачатки ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦семенников ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦округлые, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦диаметром ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,04, почти¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦на одном¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦уровне, чуть¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦наискось ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Metagonimus ¦Пресные ¦Свыше 60 видов¦В чешуе,¦0,15 - 0,22¦V-образной¦Движения ¦0,32 - 0,40 х¦ ¦yokogawaiu ¦водоемы ¦рыб 7 семейств¦реже на¦шаровидной ¦или ¦активные ¦0,09 - 0,1.¦ ¦M.katsuradai ¦стран ¦(карповые, ¦плавниках, ¦или овальной¦мешковид- ¦ ¦РП-0,05, БП -¦ ¦ ¦Дальнего ¦сомовые, ¦жабрах, в¦формы. ¦ной формы,¦ ¦0,04. Личинка¦ ¦ ¦Востока ¦окуневые, ¦подкожной ¦Оболочка ¦черный, ¦ ¦листовидной ¦ ¦ ¦(Япония, ¦лососевые, ¦соедините- ¦двуслойная ¦гранулы ¦ ¦или ¦ ¦ ¦Китай, ¦сиговые, ¦льной ¦ ¦темно-бу- ¦ ¦языковидной ¦ ¦ ¦Корея, РФ):¦хариусовые, ¦ткани, ¦ ¦рые мелкие¦ ¦формы. На¦ ¦ ¦реки ¦щуковые) ¦мышцах ¦ ¦ ¦ ¦поверхности ¦ ¦ ¦Карпат. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦передней ¦ ¦ ¦Прикарпатья¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦части тела¦ ¦ ¦и впадающие¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ясно видны¦ ¦ ¦в Черное и¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦чешуеобразные¦ ¦ ¦Каспийское ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦образования -¦ ¦ ¦моря ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦шипы. Пищевод¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦длинный, 0,18¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мм. Половой¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦синус сдвинут¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦в сторону от¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦срединной ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Cryptocotyle ¦Балтийское ¦Тресковые, ¦Подкожная ¦0,8 х 0,6.¦V-образной¦ ¦0.45 - 0,48.¦ ¦lingua ¦и Баренцево¦сельдевые и¦соедините- ¦овальной ¦формы ¦ ¦РП - 0,03 х¦ ¦ ¦море, ¦камбаловые ¦льная ¦формы. ¦ ¦ ¦0,04, ¦ ¦ ¦Северная ¦ ¦ткань, ¦Оболочка ¦ ¦ ¦субтерминаль-¦ ¦ ¦Атлантика ¦ ¦мышцы, ¦двуслойная. ¦ ¦ ¦на. БП слабо¦ ¦ ¦ ¦ ¦роговица ¦Окружена ¦ ¦ ¦выражена, в¦ ¦ ¦ ¦ ¦глаз ¦кольцом ¦ ¦ ¦задней трети¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦черного ¦ ¦ ¦тела. Личинка¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦пигмента ¦ ¦ ¦языковидной ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦формы. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Кутикула ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦покрыта ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦мелкими ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦шипиками. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Половая ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦присоска ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦крупнее РП и¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦БП позади¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦последней в¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦виде 1¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦сосочка ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Cryptocotyle ¦Дальневос- ¦Лососевые ¦Подкожная ¦0,1 - 0,4.¦V-образной¦ ¦БП немного¦ ¦sp. ¦точные моря¦(горбуша, кета,¦соедините- ¦овальная. ¦формы ¦ ¦крупнее РП,¦ ¦ ¦Тихого ¦нерка, кижуч,¦льная ткань¦Окружена ¦ ¦ ¦расположена ¦ ¦ ¦океана. ¦чавыча) ¦ ¦кольцом ¦ ¦ ¦позади нее.¦ ¦ ¦о.Сахалин. ¦ ¦ ¦черного ¦ ¦ ¦Личинка ¦ ¦ ¦оз.Долгое ¦ ¦ ¦пигмента ¦ ¦ ¦языковидной ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦формы ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Heterophyes ¦Моря, ¦Кефалевые, ¦Мускулатура¦0,13 - 0,26,¦Сердцевид-¦Метацеркария¦0,21х0,40. РП¦ ¦heterophyes ¦омывающие ¦ставридовые, ¦тела, ¦беловатой ¦ный, ¦в цисте¦- 0,03 -¦ ¦ ¦Палестину, ¦цихлидовые, ¦сердце ¦окраски, ¦занимает ¦согнута так,¦0,05. БП -¦ ¦ ¦Египет, ¦лавраковые ¦ ¦округлые или¦1/8 часть¦что ее¦0,03 - 0,04.¦ ¦ ¦Тунис, ¦ ¦ ¦слегка ¦длины тела¦передняя ¦3/4 тела¦ ¦ ¦Израиль, ¦ ¦ ¦овальные. ¦ ¦часть ¦густо покрыто¦ ¦ ¦Японию, ¦ ¦ ¦Толстая ¦ ¦налегает на¦чешуеобразны-¦ ¦ ¦Индию: ¦ ¦ ¦наружная ¦ ¦заднюю с¦ми шипиками,¦ ¦ ¦речные ¦ ¦ ¦оболочка ¦ ¦брюшной ¦передний ¦ ¦ ¦эстуарии и¦ ¦ ¦(0.004 -¦ ¦стороны ¦конец сплющен¦ ¦ ¦пресные ¦ ¦ ¦0,012) и¦ ¦ ¦дорсовентра- ¦ ¦ ¦водоемы (в¦ ¦ ¦тонкая ¦ ¦ ¦льно, задний¦ ¦ ¦т.ч. ¦ ¦ ¦внутренняя ¦ ¦ ¦округлый. ¦ ¦ ¦прудовые ¦ ¦ ¦мембрана ¦ ¦ ¦Ветви ¦ ¦ ¦х-ва) тех¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦кишечника ¦ ¦ ¦же стран ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦тянутся до¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦заднего конца¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦тела, сразу¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦за ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦бифуркацией ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦они шире, чем¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦в задней¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦части ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Nanophyetus ¦Реки, ¦Лососевые ¦Почки, ¦0,21 - 0,35,¦Крупный ¦ ¦0,35 - 0,65 х¦ ¦salmincola ¦впадающие в¦(таймень, ¦мышцы ¦округлые (в¦0,07 -¦ ¦0,18 - 0,34.¦ ¦ ¦сев. часть¦ленок, горбуша,¦плавников и¦виде белых¦0,10 х¦ ¦РП 0,07 -¦ ¦ ¦Тихого ¦кета, кижуч,¦тела, ¦точек, ¦0,23 -¦ ¦0,12, БП -¦ ¦ ¦океана ¦чавыча, кумжа,¦жабры, ¦видимых ¦0,24, ¦ ¦0,07 - 0,11,¦ ¦ ¦(США, ¦американская ¦печень, ¦невооруженным¦темный, ¦ ¦расположена ¦ ¦ ¦Канада, в¦палия, лососи¦стенки ¦глазом). ¦наполнен ¦ ¦посередине ¦ ¦ ¦РФ -¦стальноголовый,¦кишечника ¦Прозрачная ¦непрозрач-¦ ¦длины ¦ ¦ ¦бассейн ¦атлантический):¦ ¦оболочка и¦ными ¦ ¦метацеркария.¦ ¦ ¦среднего и¦хариус, гольян,¦ ¦толстостенная¦гранулами ¦ ¦Вся кутикула¦ ¦ ¦нижнего ¦амурские язь и¦ ¦волокнистая ¦ ¦ ¦покрыта ¦ ¦ ¦Амура, ¦щука ¦ ¦соединитель- ¦ ¦ ¦тонкими, ¦ ¦ ¦побережье ¦ ¦ ¦нотканая ¦ ¦ ¦отогнутыми ¦ ¦ ¦Татарского ¦ ¦ ¦капсула ¦ ¦ ¦назад ¦ ¦ ¦пролива, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦шипиками. ¦ ¦ ¦Сахалина, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Зачатки 2¦ ¦ ¦Командорс- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦семенников в¦ ¦ ¦ких о-в) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦задней ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦половине ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦тела. Ветви¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦кишечника ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦достигают ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦зачатков ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦семенников ¦ +--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+-------------+ ¦Echinochasmus ¦Пресные ¦Щука, карповые¦Жабры (на¦0,05 - 0,11 х¦Узкий ¦Движения ¦0,0116 -¦ ¦perfoliatus ¦водоемы ¦(белоглазка, ¦основании ¦0,04 - 0,098,¦извилистый¦слабые ¦0,043. РП =¦ ¦ ¦Нижнего ¦тарань, линь,¦жаберных ¦круглой ¦из двух¦ ¦БП = 0,0258 -¦ ¦ ¦Поволжья, ¦сазан, язь,¦лепестков) ¦формы. ¦экскретор-¦ ¦0,03. Тело¦ ¦ ¦Зап. ¦синец, плотва,¦ ¦Оболочка ¦ных ¦ ¦личинки ¦ ¦ ¦Казахстана ¦вобла, карась,¦ ¦прозрачная, ¦полостей ¦ ¦широкоокруг- ¦ ¦ ¦(Актюбинс- ¦лещ, уклея,¦ ¦эластичная. ¦ ¦ ¦лое. РП¦ ¦ ¦кая обл);¦жерех и др.),¦ ¦0,002 - 0,003¦ ¦ ¦окружена ¦ ¦ ¦бассейны ¦ерш, судак,¦ ¦ ¦ ¦ ¦адоральным ¦ ¦ ¦Зап. Двины,¦окунь, вьюн,¦ ¦ ¦ ¦ ¦диском, ¦ ¦ ¦Днепра, ¦сом ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ширина его¦ ¦ ¦Березины, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦менее ширины¦ ¦ ¦Сожа, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦тела. Крупные¦ ¦ ¦Припяти ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦светопрелом- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ляющие шипы¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦на нем¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦расположены ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦дорсально, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦прерванным ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦рядом из 24¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦шипов ¦ L--------------+-----------+---------------+-----------+-------------+----------+------------+--------------
______________________________
* РП - ротовая присоска.
** БП - брюшная присоска
Дальнейшее определение метацеркарий, имеющих вышеперечисленные
признаки, проводят следующим образом:
1(2) Метацеркарии локализуются в различных тканях ракообразных .....
.......................................... сем. Paragonimidae (п. 4.2.6)
2 (1) Метацеркарии локализуются в различных тканях рыб
3 (4) Передний конец тела вооружен шипами ..........................
........................................ сем. Echinostomalidae (п. 4.2.5)
4 (3) Передний конец тела не несет шипов
5 (8) Ветви кишечника длинные, до конца тела
6 (7) Ветви кишечника прямые. Шипиков вокруг ротового отверстия нет.
Брюшная присоска, как правило, крупнее ротовой. Предглотки нет.
Выделительный пузырь большой, темный ....................................
............................................ сем.Opisthorchidae(n.4.2.2)
7(6) Концы ветвей кишечника более или менее загибаются внутрь, к
срединной линии тела. Предглотка имеется ................................
............................................. сем.Heterophyidae(n.4.2.3)
8(5) Ветви кишечника короткие не переходят за уровень заднего края
зачатков семенников.......................... сем.Nanophyetidae(n.4.2.4)
4.2.2. К сем. Opisthorchidae относятся трематоды с удлиненным,
сплющенным и всегда заметно суженным кпереди телом. Присоски сравнительно
слабо развиты и сближены. Ветви кишечника длинные, пищевод разной длины.
Во взрослом состоянии - паразиты желчных протоков печени, желчного пузыря
и поджелудочной железы млекопитающих, птиц, рептилий.
1(2) Циста с толстой оболочкой, сферическая ........................
................................... ... Metorchis xanthosomus (рис.8)*(3)
2(1) Циста тонкостенная, сферическая или овальная
3(6) Пищевод длинный, развилок кишечника удален от ротовой присоски
4(5) Шипики по всему телу. Желто-коричневая пигментация тела.
Ротовая присоска меньше брюшной ............ Clonorchis sinensis (рис.11)
5(4) Шипики до заднего края брюшной присоски*(4). Тело не
пигментировано. Ротовая и брюшная присоски примерно равны по величине
......................................... Opisthorchis felineus (рис.7)
6(3) Пищевод короткий, развилок кишечника приближен к ротовой
присоске
7(8) Тело покрыто шипиками, немного не доходящими до заднего конца
тела. Брюшная присоска крупнее ротовой ..................................
..................................... Pseudamphistomum truncatum (рис.9)
8(7) Шипики до уровня заднего края брюшной присоски. Присоски
одинакового размера............................. Metorchis bilis (рис.10).
4.2.3. К сем. Heterophyidae относятся мелкие трематоды с телом,
покрытым чешуеобразными шипиками, число которых уменьшается к заднему
концу. Присоски слабо развиты. У видов, имеющих медицинское значение
ротовая присоска без шипов. Зачатки семенников в заднем конце тела,
обычно на одном горизонтальном уровне или слегка наискось. На брюшной
стороне имеется более или менее сильно развитая впадина - генитальный
синус, в котором бывает скрыта редуцированная брюшная присоска. Имеется
половая присоска, которая часто объединяется с брюшной в общий комплекс.
Обычно паразиты кишечника рыбоядных птиц и млекопитающих. Случаи
заражения человека Heterophyes heterophyes описаны в Японии, Индии,
Палестине, Египте, Тунисе. Заболевания человека, вызванные
паразитированием Metagonimus yokogawai, регистрируются только в странах
Юго-Восточной Азии и южной части Дальнего Востока РФ, в то время как в
Европейско-Кавказской части ареала трематода обнаружена лишь
у млекопитающих и птиц.
1(2) Экскреторный пузырь сердцевидный ..............................
....................................... Heterophyes heterophyes (рис.13)
2(1) Экскреторный пузырь иной формы (V-образной, Y-образной или
мешковидной формы)
3(4) Половой синус сдвинут в сторону................................
...................Metagonimus yokogawai, Metagonimus katsuradai (рис.12)
4(3) Половой синус расположен медианно
5(8) Половая присоска представлена двумя более или менее выраженными
сосочками впереди брюшной присоски
6(7) Предглотка длинная, пищевод достигает половины длины тела.
Преимущественно у карповых рыб Apophalus muehlingi (рис.15)
7(6) Предглотка короткая, пищевод не более 1/4 тела. Преимущественно
у окуневых рыб............................. Rossicotrema donicum (рис.14)
8(5) Половая присоска представлена одним сосочком, расположенным
позади брюшной присоски......................... р. Cryptocotyle (рис.16)
4.2.4. К сем. Nanophyetidae относятся маленькие грушевидные или удлиненные трематоды. Ротовая присоска субтерминальна, хорошо развита. Глотка имеется. Пищевод очень короткий, кишечник различной длины (ветви не переходят за уровень заднего края зачатков семенников). Брюшная присоска в средней трети тела. Зачатки семенников симметрично лежат в задней части тела. Выделительный пузырь мешковидный. Паразиты кишечника человека, рыбоядных млекопитающих и птиц (Nanophyetus salmincola) (рис.17).
4.2.5. У трематод сем. Echinostomatidae передний конец тела образует особый воротничок (адоральный диск), окружающий ротовую присоску и несущий по краю одинарный или двойной ряд крупных шипов, число и расположение которых определенно для отдельных родов и видов. Определение связано с трудностями, так как на первых этапах развития (10 - 12 дней) личинки не имеют адорального диска. Половозрелые черви р. Echinochasmus - паразиты кишечника рыбоядных птиц. Описаны случаи заражения человека Echinochasmus perfoliatus (рис.18).
4.2.6. Тело эксцистированной метацеркарии сем. Paragonimidae удлиненно-овальной формы. В живом виде метацеркария способна сильно вытягиваться и сокращаться. Тегумент вооружен густыми рядами шипиков, величина которых уменьшается к заднему концу. Присоски развиты слабо, одинакового размера, в ротовой почти всегда имеется стилет. Пищевод короткий, ветви кишечника достигают конца тела, все пространство между ними заполняет большой мешковидный черный (в проходящем свете) экскреторный пузырь. Впереди брюшной присоски располагаются разделенные на две группы 14 крупных железистых клеток (рис.19 - 22).
В табл.3 приведены диагностические признаки метацеркарий парагонимид, достоверно зарегистрированных в качестве возбудителей разных форм парагонимоза у человека. Тем не менее, нужно считать, что потенциальное медицинское значение имеют все виды парагонимид: одни вызывают типичный легочный парагонимоз, другие дают больший процент атипичных локализаций, а третьи не развиваются в человеке до стадии мариты, а используют его как резервуарного хозяина.
Таблица 3
Дифференциальные признаки метацеркарий трематод сем. Paragonimidae, опасных для здоровья человека
----------------T--------------------T-------------------T--------------T-----------------------------¬ ¦ Вид гельминта ¦ Географическое ¦ Виды пресноводных ¦Размер и форма¦ Строение и размеры ¦ ¦ ¦ распространение ¦ ракообразных - ¦ цисты (мм) ¦ освобожденной от цисты ¦ ¦ ¦ ¦ вторых ¦ ¦ личинки (в мм) ¦ ¦ ¦ ¦ дополнительных ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ хозяев ¦ ¦ ¦ +---------------+--------------------+-------------------+--------------+-----------------------------+ ¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ +---------------+--------------------+-------------------+--------------+-----------------------------+ ¦Paragonimus ¦Индия, Шри Ланка,¦Крабы р.¦0,259 - 0,300¦0,8 - 1,1 х 0,27- 0,38. РП -¦ ¦westermani ¦Таиланд, Малайзия,¦Parathelphysa, ¦сферическая, ¦0,065 - 0,08 х 0,09-0,1, БП -¦ ¦westermani ¦Индонезия, КНР,¦Candidopotamon, ¦оболочка ¦0,115 - 0,14 х 0,0117 -¦ ¦ ¦Япония, Россия¦Potamon и др., раки¦трехслойная ¦0,147, расположена¦ ¦ ¦(южные и центральные¦р. Cambaroicles ¦ ¦преэкваториально. Поверхность¦ ¦ ¦районы Хабаровского¦ ¦ ¦тела густо покрыта шипиками.¦ ¦ ¦края, Южное¦ ¦ ¦Кишечные стволы делают три¦ ¦ ¦Приморье) ¦ ¦ ¦изгиба и тянутся до конца¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦тела ¦ +---------------+--------------------+-------------------+--------------+-----------------------------+ ¦P.w. ichunensic¦КНР, Россия (южные и¦Раки Cambaroides¦0,259 - 0,347¦0,4 - 0,86 х 0,22 - 0,15. РП¦ ¦ ¦центральные районы¦schrencki, С.¦сферическая, ¦- 0,08 - 0,09, стилет - до¦ ¦ ¦Хабаровского края,¦dauricus ¦оболочка ¦0,017, БП - 0,10 - 0,11.¦ ¦ ¦Южное Приморье) ¦ ¦трехслойная ¦Эксцистированная метацеркария¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦очень подвижна. Вся¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦поверхность густо покрыта¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦одиночными шипами ¦ +---------------+--------------------+-------------------+--------------+-----------------------------+ ¦P. w.fuipinus ¦Филиппины ¦Крабы ¦0,295 x 0,278,¦0,432 - 0,624х0,192 - 0,269.¦ ¦ ¦ ¦Sundathelpnysa ¦оболочка ¦РП - 0,074 х 0,079, стилет¦ ¦ ¦ ¦picta, S.¦двуслойная ¦0,012-0,019. БП - 0,079 -¦ ¦ ¦ ¦philippina ¦ ¦0,096 х 0,084 - 0,101 ¦ +---------------+--------------------+-------------------+--------------+-----------------------------+ ¦P. heterotremus¦Таиланд, КНР, Лаос ¦Крабы p. Potamin,¦0,274 - 0,319¦0,34 х 0,08, РП - 0,04 -¦ ¦ ¦ ¦Potamon ¦х 0,217 -¦0,07, стилет кинжалообразный,¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,251, ¦БП - 0,05 - 0,08 х 0,06.¦ ¦ ¦ ¦ ¦оболочка ¦Ветви кишечника утолщаются¦ ¦ ¦ ¦ ¦трехслойная* ¦кзади, образуя 2-3 изгиба ¦ +---------------+--------------------+-------------------+--------------+-----------------------------+ ¦P. kellicotti ¦Северная Америка ¦Раки р.¦0,381 - 0,457¦0,524 - 0,866 х 0,209 -¦ ¦ ¦ ¦Cambaroides, ¦x 0,381 -¦0,295. РП - 0,06 х 0,08,¦ ¦ ¦ ¦Orconectes ¦0,447, ¦стилет 009 - 0,022, БП -¦ ¦ ¦ ¦ ¦оболочка ¦0,067 х 0,111. Ветви¦ ¦ ¦ ¦ ¦двуслойная ¦кишечника узкие у бифуркации,¦ ¦ ¦ ¦ ¦толстая, ¦расширяются кзади ¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,056-0,067 ¦ ¦ +---------------+--------------------+-------------------+--------------+-----------------------------+ ¦P. pulmonulis ¦Япония, Тайвань,¦Крабы Eriocher¦0,389 - 0,450¦РП несколько крупнее БП. Тело¦ ¦ ¦КНР, Корея, возможно¦japonicus, раки¦сферическая, ¦покрыто редкими шипиками.¦ ¦ ¦Россия (Южное¦Cambaroides similis¦оболочка ¦Кишечные стволы извиваются¦ ¦ ¦Приморье) ¦ ¦трехслойная . ¦слабо ¦ +---------------+--------------------+-------------------+--------------+-----------------------------+ ¦P. skjabini ¦КНР ¦Крабы Potamon¦0,427 - 0,436¦0,453 - 1,138 х 0,188 -¦ ¦ ¦ ¦denticulatus, P.¦сферическая, ¦0,533. Кишечные стволы¦ ¦ ¦ ¦yaanensis ¦оболочка ¦извилистые ¦ ¦ ¦ ¦ ¦трехслойная ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,010 - 0,014 ¦ ¦ +---------------+--------------------+-------------------+--------------+-----------------------------+ ¦P. техicaпus ¦Перу, Панама,¦Крабы ¦Не ¦ ¦ ¦ ¦Коста-Рика, ¦p. Potamocarcinis,¦инцистируется ¦ ¦ ¦ ¦Гватемала, Эквадор,¦Psendothelphysa, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Гондурас, Сальвадор,¦Ptychophalivs ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Мексика ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------+--------------------+-------------------+--------------+-----------------------------+ ¦P. ¦Камерун, Либерия,¦Крабы ¦Оболочка ¦ ¦ ¦uterobilaterali¦Нигерия, Гвинея,¦p. Liberonautes,¦однослойная ¦ ¦ ¦s ¦Габон ¦Sudanonautes ¦ ¦ ¦ L---------------+--------------------+-------------------+--------------+------------------------------
______________________________
* Наружный слой тонкий (0,004 мм), сильно преломляющий свет, средний слой имеет характерные утолщения у противоположных полюсов.
4.3. Дифференциальная диагностика личинок нематод
4.3.1. Нематоды, заражение которыми происходит через рыбную продукцию, относятся к разным систематическим группам и разнообразны по морфологическому строению. Общие систематические признаки: удлиненная и веретенообразная форма; наличие кутикулы; хорошо развитая пищеварительная система; раздельная половая система - непарная у самцов, парная у самок (на стадии личинки они различаются в основном по форме хвостового конца); развитие с 4 линьками и 5 стадиями. Жизненный цикл идет с участием одного или двух промежуточных хозяев, часто и резервуарного хозяина, в которых обычно встречаются личинки II, III, иногда IV стадии. Инвазионными для человека являются личинки III и IV стадии.
Размеры личинок, характер вооружения головного конца, строение пищеварительной системы используются в систематике нематод для дифференциальной диагностики (табл.4).
4.3.2. К сем. Dioctophymidae относятся нематоды с простым головным концом (без мышечной присоски). Кутикула поперечно исчерчена. Dioctophyme renale - во взрослом состоянии паразиты почек диких и домашних животных, редко человека. Промежуточные хозяева - олигохеты, роль резервуарных хозяев выполняют земноводные и рыбы, в которых развитие не идет - личинки остаются на III стадии (рис.24). Отмечены случаи заражения человека диоктофимидами Eustrongylides excisus. Обычно это паразиты желудка водоплавающих птиц. В рыбах, играющих роль второго промежуточного или резервуарного хозяина, встречаются на III и IV стадии развития. У рыб семейства осетровых при определенных условиях Eustrongylides excisus могут развиваться до половозрелой стадии. В этом случае, опасности для человека они не представляют.
4.3.3. К сем. Gnathostomatidae относятся нематоды с 4 - 6 одноядерными пищеводными железами. Пищевод состоит из мышечного и железистого отделов. Губы (псевдолабии) большие трехлопастные или куполообразные.
Личинки Echinocephalus sinensis (рис.25) и Echinocephalus sp. представляют потенциальную угрозу для здоровья человека. В эксперименте заражаются котята и макаки-резусы: личинки III стадии проникают через стенки желудка, толстого и тонкого кишечника. Заражение человека возможно при употреблении в пищу сырых (или не проваренных) съедобных морских моллюсков. Нельзя исключать как фактор заражения и морских черепах, в кишечнике и желудке которых встречаются личинки IV стадии. Облигатные окончательные хозяева - морские скаты.
Представители сем. Gnathostomatidae паразитируют у человека, но до половозрелой стадии не развиваются. Окончательные хозяева - кошка, собака, свинья, реже корова. Резервуарные хозяева - земноводные, пресмыкающиеся, рыбы. Живые личинки Gnathostoma hispidum (рис.26) и Gnathostoma spinigerum содержат кроваво-красную полостную жидкость.
4.3.4. Наиболее распространенными паразитами почти всех видов морских, проходных, полупроходных рыб, а также некоторых пресноводных рыб, экологически связанных с опресненными зонами морей, являются личинки сем. Anisakidae III стадии (рис.27 - 31). Тонкие личинки с более или менее выраженными губами вокруг ротового отверстия и сверлильным зубом. Кутикула гладкая, с нежными кольцевыми штрихами. Ротовая полость (стома) и глотка выражены слабо, а пищевод - хорошо. Для диагностики анизакисных личинок в качестве основных дифференциальных признаков следует использовать структуру переднего отдела пищеварительного тракта, величины отношений длины тела к длине пищевода, длины тела к длине желудочка, а также положение экскреторной поры.
Хозяинная (гостальная) специфичность ко II промежуточным хозяевам отсутствует или выражена слабо. Ими обычно являются мелкие рыбы, а резервуарными - крупные рыбы и головоногие моллюски (кальмары, осьминоги и каракатицы), в которых накапливаются личинки 3-ей стадии. Последняя линька происходит в позвоночных - окончательных хозяевах (ластоногих и китообразных).
Таблица 4
Дифференциальные признаки личинок нематод сем. Dioctophymidae, Gnathostomatidae, Anisakidae, опасных для здоровья человека
----------------T--------------T---------------T-------------T---------------T---------------T--------------¬ ¦ Вид гельминта ¦Географическое¦Виды животных, ¦Локализация в¦ Строение и ¦Характеристика ¦ Особенности ¦ ¦ ¦распростране- ¦наиболее часто ¦ теле ¦размер личинок ¦ головного ¦ строения ¦ ¦ ¦ ние ¦ играющие роль ¦промежуточно-¦ ¦ вооружения и ¦пищеваритель- ¦ ¦ ¦ ¦ промежуточных ¦ го или ¦ ¦нервной системы¦ ной и ¦ ¦ ¦ ¦ или ¦резервуарного¦ ¦ личинок ¦выделительной ¦ ¦ ¦ ¦ резервуарных ¦ хозяина ¦ ¦ ¦ систем ¦ ¦ ¦ ¦ хозяев ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+--------------+ ¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦ +---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+--------------+ ¦Dioctophyme ¦Бассейны рек¦Рыбы: амурский¦У рыб: стенка¦Тело ¦На головном¦Ротовое ¦ ¦renale ¦Аму-Дарьи, ¦лопатонос, ¦кишечника и¦нитевидное, с¦конце 12¦отверстие ¦ ¦ ¦Вахш, ¦щука, жерех,¦желудка, ¦суживающимся ¦чувствительных ¦ведет в узкую¦ ¦ ¦Аральское море¦язь, чехонь,¦различные ¦головным концом¦сосочков, ¦ротовую ¦ ¦ ¦ ¦плотва, пескарь¦органы и¦и ¦расположенных в¦капсулу, ¦ ¦ ¦ ¦туркестанский, ¦ткани ¦оканчивающимся ¦2 круга по 6 в¦переходящую в¦ ¦ ¦ ¦аральские усач¦у лягушек: в¦тупо задним,¦каждом ¦толстостенный ¦ ¦ ¦ ¦и шемая,¦стенке ¦желтоватое или¦(наружные ¦пищевод, длина¦ ¦ ¦ ¦быстрянка, сом,¦желудка, в¦бледно-розовое.¦крупнее таковых¦которого 2,02¦ ¦ ¦ ¦сомик ¦мышцах ¦Длина 6,9 -¦внутреннего ¦- 2,41, ширина¦ ¦ ¦ ¦карликовый, ¦живота, спины¦8,0, ширина¦круга). Нервное¦0,18 - 0,19¦ ¦ ¦ ¦гамбузия, окунь¦и конечностей¦0,11 - 0,20 мм.¦кольцо сдвинуто¦мм. При¦ ¦ ¦ ¦Земноводные: ¦ ¦У личинок обоих¦к головному¦переходе ¦ ¦ ¦ ¦лягушка озерная¦ ¦полов хвост¦концу и удалено¦пищевода в¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦симметричный. В¦от него на 0,05¦кишку ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦соединительно- ¦мм ¦расположен ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦тканных ¦ ¦трехстворчатый¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦капсулах ¦ ¦клапан. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Средняя кишка¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦состоит из¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦одного ряда¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦клеток ¦ +---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+--------------+ ¦Eustrongylides ¦Бассейны ¦Осетровые ¦Полость тела,¦Тело суживается¦На головном¦Длина ротовой¦ ¦excisus ¦Каспийского ¦(осетр, ¦мускулатура ¦к обоим концам.¦конце также 2¦полости 0,09.¦ ¦ ¦моря, Дуная,¦белуга): ¦стенки ¦Длина тела 8 -¦круга папилл по¦пищевода 2,46¦ ¦ ¦Днестра, Оби ¦сельдь-чернос- ¦брюшной ¦50, ширина 0,11¦6 в каждом.¦- 4,53, задней¦ ¦ ¦ ¦пинка, щука,¦полости, реже¦- 0,19 мм.¦Сосочки ¦кишки 0,13 -¦ ¦ ¦ ¦карповые ¦стенки ¦Головной конец¦наружного круга¦0,56 мм.¦ ¦ ¦ ¦(жерех, лещ,¦кишечника, ¦в виде¦короткие, с¦Пищеводный ¦ ¦ ¦ ¦вобла, ¦печень, ¦пирамиды, ¦широким ¦клапан развит¦ ¦ ¦ ¦красноперка); ¦семенники ¦хвостовой ¦основанием, в¦слабо ¦ ¦ ¦ ¦сом, окунь ¦ ¦асимметричный ¦виде холмиков с¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(у личинок¦тупыми ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦самцов) и¦вершинами. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦симметричный, ¦Нервное кольцо¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦закругленный (у¦в 0,09-0,11 мм¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦личинок самок).¦от головного¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦В капсулах или¦конца ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦свободно ¦ ¦ ¦ +---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+--------------+ ¦Echinochephalus¦Морские ¦Двустворчатые ¦У моллюсков:¦Личинки II¦У личинок II¦Пищевод из¦ ¦sinensis ¦тропические и¦моллюски: ¦в просвете¦стадии: самцы -¦стадии ¦мышечного и¦ ¦ ¦субтропические¦обыкновенная и¦гонадукта с¦6,4 +- 0,8 мм:¦конический ¦железистого ¦ ¦ ¦воды (Гонконг,¦гигантская ¦поражением ¦самки - 7,1 +-¦головной конец¦отделов. В¦ ¦ ¦юж. Китай,¦устрицы, ¦ресничного ¦1,2 мм: III¦с 6 рядами¦месте перехода¦ ¦ ¦Цейлон, зап.¦пинктада, ¦эпителия ¦стадии: самцы¦головных шипов,¦одной части в¦ ¦ ¦Австралия) ¦амусиум ¦у черепах: в¦-11,6 +- 1,1¦III стадии -¦другую ¦ ¦ ¦ ¦Пресмыкающиеся:¦желудке и¦мм: самки -¦бульбусовидный ¦вентрально ¦ ¦ ¦ ¦Логгерхед ¦кишечнике ¦11,2 +- 0,8 мм.¦с 7 рядами¦открывается ¦ ¦ ¦ ¦(головастая ¦ ¦В ¦шипов (первый¦экскреторная ¦ ¦ ¦ ¦морская ¦ ¦соединительнот-¦из 6¦пора ¦ ¦ ¦ ¦черепаха-карет-¦ ¦канных капсулах¦маленьких). ¦ ¦ ¦ ¦ ¦та) ¦ ¦ ¦Нервное кольцо¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦приближено к¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦головному концу¦ ¦ +---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+--------------+ ¦Gnathostoma ¦Аральское ¦Рыбы: карповые;¦Мускулатура, ¦Личинка III¦Округлое ¦Деление ¦ ¦hispidum ¦море: реки¦сом, гамбузия,¦реже полость¦ст., свернута в¦головное ¦пищевода на¦ ¦ ¦Амударья и¦окунь, судак ¦тела и¦спираль ¦вздутие ¦мышечную и¦ ¦ ¦Вахш; низовья¦Земноводные: ¦внутренние ¦диаметром 1 мм,¦вооружено 4¦железистую ¦ ¦ ¦и дельта¦лягушки ¦органы ¦в капсуле.¦рядами шипов по¦часть выражено¦ ¦ ¦Волги; ¦Пресмыкающиеся:¦ ¦Длина тела 1,3¦30 - 40 в¦слабо. Вдоль¦ ¦ ¦р.Красная ¦пресноводные ¦ ¦- 2,3, ширина¦каждом. На его¦пищевода ¦ ¦ ¦(Сев. Вьетнам)¦черепахи ¦ ¦0,40 мм.¦переднем конце¦примерно до¦ ¦ ¦ ¦Рыбы: ¦ ¦Кутикула ¦трехлопастные ¦его середины¦ ¦ ¦ ¦змееголовые ¦ ¦прозрачная, ¦губы, каждая с¦располагаются ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦четко ¦тремя ¦4 пищеводные¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦исчерчена, ¦сосочками. ¦железы. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦вооружена ¦Нервное кольцо¦Экскреторная ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦многочисленными¦на границе¦пора удалена¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦рядами мелких¦перехода ¦на 0,15 - 0,20¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦шипиков на всем¦пищевода в¦мм от¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦теле или его¦кишечник ¦переднего ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦передней ¦ ¦конца тела ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦половине ¦ ¦ ¦ +---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+--------------+ ¦G.spinigerum ¦Пресные ¦Лососевые; ¦ -"- ¦Личинка III¦Головное ¦Пищевод ¦ ¦ ¦водоемы ¦угорь, ¦ ¦стадии свернута¦вздутие ¦подразделен на¦ ¦ ¦Дальнего ¦желтощек, ¦ ¦в спираль в¦вооружено 4¦два отдела. 4¦ ¦ ¦Востока ¦сазан, вьюн,¦ ¦капсуле ¦рядами шипов,¦одноядерные ¦ ¦ ¦(Япония, ¦амурский сом,¦ ¦диаметром 1 мм.¦число которых в¦пищеводные ¦ ¦ ¦Таиланд, ¦китайский ¦ ¦Тело личинки¦ряду ¦железы ¦ ¦ ¦Китай, в РФ -¦окунь; ¦ ¦покрыто ¦увеличивается ¦выражены ¦ ¦ ¦бассейн Амура)¦змееголовые ¦ ¦поперечными ¦по направлению¦отчетливо. ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦рядами (более¦назад (обычно >¦Экскреторная ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦200) простых¦40). Нервное¦пора ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦заостренных ¦кольцо на¦приближена к¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦шипиков длиной¦границе ¦головному ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦0,01 мм ¦перехода ¦концу ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦пищевода в¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦кишечник ¦ ¦ +---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+--------------+ ¦Anisakis ¦Арктические ¦Рыбы: катран,¦У рыб - в¦Личинки III¦На головном¦Желудочек ¦ ¦simplex ¦воды: Тихий и¦сельдь, салака,¦полости тела,¦стадии ¦конце три¦удлиненной ¦ ¦ ¦Атлантический ¦горбуша, кета,¦на серозе¦светло-кремово-¦выраженных губы¦формы. Задняя¦ ¦ ¦океаны, ¦кижуч, нерка,¦внутренних ¦го или¦и хорошо¦его часть,¦ ¦ ¦пресные ¦чавыча, семга,¦органов, под¦беловатого ¦развитый ¦примыкающая к¦ ¦ ¦водоемы ¦кумжа, кунджа,¦перитонеаль- ¦цвета свернуты¦сверлильный ¦кишечнику, ¦ ¦ ¦Камчатки, ¦мальма, сиг,¦ной ¦в плоскую¦зуб, ¦скошена так,¦ ¦ ¦Сахалина, ¦корюшка, мойва,¦оболочкой, в¦спираль внутри¦расположенный ¦что ¦ ¦ ¦Японии ¦аргентина, ¦мышцах ¦прозрачной ¦вентрально от¦вентральная ¦ ¦ ¦ ¦треска, ¦(преимущест- ¦капсулы, реже¦ротового ¦сторона ¦ ¦ ¦ ¦путассу, сайка,¦венно брюшной¦лежат свободно¦отверстия между¦оказывается ¦ ¦ ¦ ¦навага, пикша,¦стенки, а у¦без капсулы.¦латеровентраль-¦длиннее, чем¦ ¦ ¦ ¦мерладг, сайда,¦тихоокеанских¦Длина 7 - 33¦ными губами.¦дорсальная. ¦ ¦ ¦ ¦минтай, налим,¦лососей -¦мм. Ширина тела¦Нервное кольцо¦Желудочный и¦ ¦ ¦ ¦мерлуза (хек),¦скелетных) в¦у крупных форм¦сдвинуто к¦кишечный ¦ ¦ ¦ ¦макрурус, ¦капсулах или¦составляет 0,5¦переднему концу¦отростки ¦ ¦ ¦ ¦пилобрюх, ¦свободно; у¦- 0,7 мм.¦ ¦отсутствуют. ¦ ¦ ¦ ¦морской судак,¦головоногих -¦Сквозь покровы¦ ¦Экскреторная ¦ ¦ ¦ ¦ставрида, ¦в мантии и на¦тепа хорошо¦ ¦пора ¦ ¦ ¦ ¦зубан, зубатка,¦внутренних ¦виден желудочек¦ ¦открывается на¦ ¦ ¦ ¦стэк, снэк,¦органах ¦ ¦ ¦голове между¦ ¦ ¦ ¦морской окунь,¦ ¦ ¦ ¦латеровентра- ¦ ¦ ¦ ¦терпуг, камбала¦ ¦ ¦ ¦льными губами¦ ¦ ¦ ¦и другие ¦ ¦ ¦ ¦снизу, т.е.¦ ¦ ¦ ¦Головоногие ¦ ¦ ¦ ¦снаружи от¦ ¦ ¦ ¦моллюски: ¦ ¦ ¦ ¦границы ¦ ¦ ¦ ¦осьминоги, ¦ ¦ ¦ ¦сверлильного ¦ ¦ ¦ ¦кальмары, ¦ ¦ ¦ ¦зуба ¦ ¦ ¦ ¦каракатицы ¦ ¦ ¦ ¦вентрально ¦ +---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+--------------+ ¦A.schupakovi ¦Каспийское ¦Осетр, шип,¦Серозные ¦Личинки III¦На переднем¦Пищевод ¦ ¦ ¦море, дельта¦стерлядь, ¦покровы ¦стадии желтого¦конце хорошо¦мышечный ¦ ¦ ¦Волги ¦белуга, ¦органов ¦цвета, длиной¦заметны ¦длиной 0,74 -¦ ¦ ¦ ¦севрюга, ¦брюшной ¦6,69 - 15,8,¦личиночный зуб¦1,42 мм,¦ ¦ ¦ ¦пузанок, ¦полости, у¦шириной 0,12 -¦и 4 сосочка, 2¦максимальная ¦ ¦ ¦ ¦долгинская ¦долгинской ¦0,40 мм.¦из которых¦ширина 0,05 -¦ ¦ ¦ ¦сельдь, ¦сельди ¦Кутикула с¦расположены ¦0,09 мм.¦ ¦ ¦ ¦сельдь-чернос- ¦встречается и¦поперечной и¦дорсолатерально¦Желудочек ¦ ¦ ¦ ¦пинка, ¦в мышцах ¦продольной ¦и 2¦вытянутый, ¦ ¦ ¦ ¦каспийский ¦ ¦исчерченностью ¦субвентрально. ¦0,20 - 0,46 х¦ ¦ ¦ ¦лосось, щука,¦ ¦ ¦Нервное кольцо¦0,06 - 0,18¦ ¦ ¦ ¦вобла, кутум,¦ ¦ ¦удалено от¦мм. Отношение¦ ¦ ¦ ¦линь, ¦ ¦ ¦переднего конца¦длины тела к¦ ¦ ¦ ¦красноперка, ¦ ¦ ¦тела ¦длине пищевода¦ ¦ ¦ ¦шемая, рыбец,¦ ¦ ¦на0,16-0,29 мм ¦8,2 - 11,8:1,¦ ¦ ¦ ¦чехонь, сазан,¦ ¦ ¦ ¦длины тела к¦ ¦ ¦ ¦жерех, усач,¦ ¦ ¦ ¦длине ¦ ¦ ¦ ¦лещ, ¦ ¦ ¦ ¦желудочка 23,7¦ ¦ ¦ ¦белоглазка, ¦ ¦ ¦ ¦- 27,6:1.¦ ¦ ¦ ¦густера, сопа,¦ ¦ ¦ ¦Экскреторная ¦ ¦ ¦ ¦уклея, сом,¦ ¦ ¦ ¦пора ¦ ¦ ¦ ¦окунь, судак,¦ ¦ ¦ ¦открывается на¦ ¦ ¦ ¦морской судак,¦ ¦ ¦ ¦головном конце¦ ¦ ¦ ¦берш, бычок ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+--------------+ ¦Pseudoterranova¦Сев. Атлантика¦Рыбы: акула,¦У рыб: в¦Личинки III¦Головной конец¦Удлиненный ¦ ¦decipiens ¦и Арктические¦скат, сельдь,¦мускулатуре ¦стадии 14,0 -¦несет 3¦пищевод ¦ ¦ ¦воды, ¦голец, ¦свободно, без¦33,0 мм длиной,¦достаточно ¦переходит в¦ ¦ ¦Северо-Запад- ¦тихоокеанские ¦капсул; в¦окрашены в¦хорошо ¦округлый, ¦ ¦ ¦ная Пацифика,¦лососи, хариус,¦полости тела¦коричневые или¦выраженные губы¦овальный или¦ ¦ ¦Антарктика; ¦корюшка, ¦свободно или¦красноватые ¦и небольшой¦четырехуголь- ¦ ¦ ¦пресные ¦треска, ¦покрытые ¦цвета ¦сверлильный ¦ный желудочек.¦ ¦ ¦водоемы ¦путассу, ¦капсулами, ¦ ¦зуб, ¦Желудочный ¦ ¦ ¦Камчатки, ¦мольва, навага,¦прикрепленны-¦ ¦расположенный ¦отросток ¦ ¦ ¦Сахалина ¦пикша, менек,¦ми к серозным¦ ¦между ¦отсутствует. ¦ ¦ ¦ ¦паут, ¦покровам ¦ ¦латеровентраль-¦Дистальный ¦ ¦ ¦ ¦нототения, ¦внутренних ¦ ¦ными губами.¦конец ¦ ¦ ¦ ¦синяя и пестрая¦органов; ¦ ¦Нервное кольцо¦кишечного ¦ ¦ ¦ ¦зубатка, ¦у кальмаров:¦ ¦удалено от¦отростка ¦ ¦ ¦ ¦пескарка, снэк¦в мантии и во¦ ¦переднего конца¦прикрепляется ¦ ¦ ¦ ¦(барракут), ¦внутренних ¦ ¦тела на 0,25 -¦к стенке тела¦ ¦ ¦ ¦малоротый и¦органах ¦ ¦0,31 мм ¦пучком мышц.¦ ¦ ¦ ¦клюворылый ¦ ¦ ¦ ¦Экскреторное ¦ ¦ ¦ ¦окуни, терпуг,¦ ¦ ¦ ¦отверстие на¦ ¦ ¦ ¦керчак, мегрим,¦ ¦ ¦ ¦головном конце¦ ¦ ¦ ¦атлантическая ¦ ¦ ¦ ¦между ¦ ¦ ¦ ¦длинная, ¦ ¦ ¦ ¦латеровентра- ¦ ¦ ¦ ¦палтусовидная и¦ ¦ ¦ ¦льными губами¦ ¦ ¦ ¦малоротая ¦ ¦ ¦ ¦внизу ¦ ¦ ¦ ¦камбалы, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦камбала-ерш, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦лиманда, черный¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦и синеротый¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦палтус, ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦удильщик ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Моллюски: ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦кальмары ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+--------------+ ¦Contracaecum ¦Арктические ¦Рыбы: сельдь,¦На серозе¦Личинки с¦Зачатки губ на¦Пищевод ¦ ¦osculatum ¦воды, ¦ленок, ¦внутренних ¦плотной ¦головном конце¦цилиндрический¦ ¦ ¦Атлантика ¦тихоокеанские ¦органов ¦кутикулой, 13 -¦отчетливые. ¦, с маленьким¦ ¦ ¦(Балтийское ¦лососи, семга,¦(печень, ¦28 мм длиной и¦Личиночный зуб¦желудочком. ¦ ¦ ¦море): озеро¦омуль, ¦пилорические ¦0,41 - 0,52 мм¦расположен ¦Имеются ¦ ¦ ¦Байкал с¦обыкновенный и¦придатки, ¦шириной. Могут¦между зачатками¦кишечный и¦ ¦ ¦предустьевыми ¦байкальский ¦мезентерий). ¦быть в капсулах¦латеровентраль-¦желудочный ¦ ¦ ¦участками рек;¦хариусы, ¦ ¦и без них ¦ных губ, еще не¦отростки, ¦ ¦ ¦водоемы ¦корюшка, ¦ ¦ ¦разделенных ¦направленные в¦ ¦ ¦Камчатки, ¦треска, налим,¦ ¦ ¦перетяжкой. ¦противополож- ¦ ¦ ¦Сахалина ¦мерланг, ¦ ¦ ¦Нервное кольцо¦ные стороны.¦ ¦ ¦ ¦мольва, ¦ ¦ ¦в 0,37 - 0,42¦Кишечный ¦ ¦ ¦ ¦длиннокрылый и¦ ¦ ¦мм от переднего¦вырост обычно¦ ¦ ¦ ¦желтокрылый ¦ ¦ ¦конца тела ¦длиннее ¦ ¦ ¦ ¦бычки, морской¦ ¦ ¦ ¦половины ¦ ¦ ¦ ¦окунь, керчак,¦ ¦ ¦ ¦пищевода. ¦ ¦ ¦ ¦рогатка: ¦ ¦ ¦ ¦Экскреторная ¦ ¦ ¦ ¦песчаная, ¦ ¦ ¦ ¦пора ¦ ¦ ¦ ¦ушканская, ¦ ¦ ¦ ¦открывается на¦ ¦ ¦ ¦жирная и¦ ¦ ¦ ¦вентральной ¦ ¦ ¦ ¦плоская ¦ ¦ ¦ ¦стороне ¦ ¦ ¦ ¦широколобки; ¦ ¦ ¦ ¦головного ¦ ¦ ¦ ¦голомянка, ¦ ¦ ¦ ¦конца у¦ ¦ ¦ ¦палтусовидная и¦ ¦ ¦ ¦основания ¦ ¦ ¦ ¦морская ¦ ¦ ¦ ¦субвентральных¦ ¦ ¦ ¦камбалы, ¦ ¦ ¦ ¦губ ¦ ¦ ¦ ¦лиманда, черный¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦палтус ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦Моллюски: ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦кальмары ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+--------------+ ¦Sulcascaris ¦Космополит: ¦Съедобные ¦В спизулах -¦В моллюсках -¦Головной конец¦Пищевод 1,3 -¦ ¦sulcata ¦теплые и¦двустворчатые ¦во всех¦личинки IV¦личинки IV¦4,0 мм длиной¦ ¦ ¦умеренные воды¦моллюски: ¦тканях: во¦стадии (8,3 -¦стадии несет¦при ширине¦ ¦ ¦Мирового ¦устрицы, ¦внутренних ¦45 мм длиной),¦три оформленных¦0,08 - 0,23¦ ¦ ¦океана, ¦спондилюс, ¦органах - в¦редко III¦губы, края¦мм. Желудочек¦ ¦ ¦включая ¦пинктада, ¦60 %, в ноге¦стадии (4,2 -¦которых ¦удлиненной ¦ ¦ ¦Красное, ¦пинна, ¦- в 27%, в¦4,3 мм): в¦характеризуются¦формы. Имеется¦ ¦ ¦Средиземное и¦спизулла, ¦аддукторе - в¦черепахах - IV¦редкой ¦короткий ¦ ¦ ¦Карибское ¦мактра; морские¦12%, в мантии¦стадии (19 - 33¦зазубненностью.¦кишечный ¦ ¦ ¦моря; Южную,¦гребешки ¦- в 1%; ¦мм) и взрослые.¦Между главными¦вырост. ¦ ¦ ¦Среднюю и¦(пектен, ¦в гребешках -¦Личинки могут¦губами ¦Экскреторная ¦ ¦ ¦Западную ¦аргопектен, ¦в мышце -¦быть в¦помещаются ¦пора ¦ ¦ ¦Атлантику; ¦хламис, ¦аддукторе и¦соединительно- ¦интерлабии. ¦открывается на¦ ¦ ¦Зап. Пацифику¦амусиум) ¦гонадах; ¦тканных ¦Нервное кольцо¦головном конце¦ ¦ ¦(Австралия, ¦Морские ¦у черепах - в¦капсулах. ¦отстоит от¦при основании¦ ¦ ¦Цейлон) ¦черепахи: ¦желудке и¦Мелкие личинки¦переднего конца¦вентральной ¦ ¦ ¦ ¦хелония ¦кишечнике, ¦- белые и¦тела личинки на¦интерлабии ¦ ¦ ¦ ¦(зеленая или¦прикрепленные¦малозаметные, ¦расстоянии ¦ ¦ ¦ ¦ ¦суповая ¦к стенке ¦более крупные¦0,25- 0,67 мм ¦ ¦ ¦ ¦ ¦черепаха), ¦ ¦от желтого до¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦логгерхед ¦ ¦светло-оранже- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(головастая ¦ ¦вого или¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦морская ¦ ¦коричневого ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦черепаха -¦ ¦цвета. В случае¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦каретта) ¦ ¦поражения их¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦гаплоспоридиями¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦(гиперпарази- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦тизм) они¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦становятся ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦темно-коричне- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦выми, почти¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦черными ¦ ¦ ¦ L---------------+--------------+---------------+-------------+---------------+---------------+---------------
У съедобных двустворчатых морских моллюсков и морских черепах встречаются личинки Sulcascaris sulcata (рис.31). В настоящее время эта нематода не рассматривается как представляющая угрозу для здоровья человека. Однако наличие у нее гиперпаразитов (Urosporidium spisuli) практически в 100% случаев, и то, что устриц и гребешков едят как вареными, так и сырыми, требует выбраковывания моллюсков с нематодами из эстетических соображений (портится товарный вид). Проблема анизакидозов человека особенно существенна для Японии, Кореи, США, Великобритании, Франции, Нидерландов, стран Скандинавии, прибрежных районов России (Тихоокеанское побережье, побережье северных морей, Балтийское и Каспийское моря), где в пищу употребляют сырую или слабо обработанную кулинарно, т.е. необеззараженную морскую рыбу. Диагностика заболевания у человека затруднена, так как паразит не развивается до половой зрелости. В связи с этим, необходима тщательная паразитологическая экспертиза морской рыбы.
4.4. Дифференциальная диагностика личинок скребней
Возможно заражение человека скребнями, относящимися к сем. Polymorphidae (р. Corynosoma и р. Bolbosoma). Во взрослом состоянии они паразитируют в кишечнике у морских млекопитающих и рыбоядных птиц. Рыба может быть как резервуарным, так и окончательным хозяином у разных видов скребней. В резервуарном хозяине личинка мигрирует из кишечника в полость тела, потом в другие органы и мышцы, где инцистируется, и остается на стадии личинки - акантеллы. Для личинки (как и для зрелых) скребней характерно наличие на переднем конце тела хоботка, вооруженного загнутыми назад крючками. У личинки, находящейся в рыбе, хоботок обычно ввернут внутрь, и выворачивается наружу при помещении ее в воду или при попадании в окончательного хозяина. Акантеллы локализуются у рыб в полости тела, внутренних органах и тканях (брыжейка, гонады, печень, почки, серозные покровы желудка и кишечника, мышцы). Личинки в прозрачных капсулах.
4.4.1. P. Corynosoma. Виды этого рода распространены в разных районах Мирового океана, во всех морях, омывающих Россию, а также в Каспийском море и Ладожском озере, реках, впадающих в них.
Второй промежуточный хозяин - различные морские, проходные, а также пресноводные рыбы, обитающие в нижнем течении рек и в некоторых континентальных водоемах (лососевые, корюшковые, сельдевые, тресковые, мерлузовые, нототениевые, белокровные, терпуговые, камбаловые), и миноги. Обычны акантеллы р. Corynosoma и для осетровых Каспийского моря.
Наиболее часто заражены придонные рыбы.
Размер капсул с личинками 2 - 4 мм. Тело личинки грушевидной формы, расширенное к передней части, длиной до 10 мм. Поверхность передней части личинки покрыта шипами: более крупными, расположенными в шахматном порядке, - в первой трети тела и более мелкими, расположенными хаотично, - в остальной части. Хоботок почти цилиндрический, слегка расширяющийся в середине. У С. strumosum (рис.6) на хоботке 18 продольных рядов крючьев по 10 - 12 в каждом ряду. Тело 3,5 - 9 мм длиной, шириной до 1,5 мм. У С. semerse на хоботке 22 - 24 продольных рядов крючьев, длина личинки до 5 мм.
Половозрелые формы - паразиты кишечника морских млекопитающих и рыбоядных птиц.
4.4.2. P. Bolbosoma. Акантеллы болбозом встречаются в полости тела и на внутренних органах у скумбриевых рыб в Сев. Атлантике; мерлузовых, волосохвостых в Южной Атлантике; у лососевых, скарпеновых, бериксовых, гемпиловых и скумбриевых в Тихом океане.
У В. caenoforme тело личинки обычно цилиндрическое, но в передней части образует бульбусовидное расширение, передняя часть которого вооружена шипами. Акантеллы размером 7 - 12 х 0,9 - 1,2 мм. Живые личинки розовато-красноватого цвета. На цилиндрическом хоботке 18 продольных рядов крючьев по 6 в каждом ряду.
Половозрелые формы локализуются в кишечнике морских млекопитающих.
5. Методы установления жизнеспособности личинок гельминтов
При обнаружении личинок в рыбной продукции, в том числе при оценке эффективности ее обеззараживания, необходимо определить их жизнеспособность.
5.1. По морфологическим признакам и двигательной активности
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Химические реактивы: физиологический раствор
2. Предметные стекла
3. Покровные стекла
4. Чашки Петри
5. Часовые стекла
6. Колба (0,1 - 0,2 л)
7. Пробирки
8. Пинцеты глазные
9. Спиртовка
10. Спиртовой термометр для воды
11. Препаровальные иглы разной толщины
12. Бинокулярный микроскоп типа МБС
13. Лупа
14. Осветитель для бинокуляра любой марки
15. Световой микроскоп типа Виолам, Бимам
16. Осветитель к микроскопу любой марки
5.1.1. Личинок цестод, нематод и скребней помещают в чашку Петри или часовое стекло с подогретым физиологическим раствором (37 - 40°С) и рассматривают под бинокулярной лупой (микроскопом типа МБС) при увеличении, соответствующем размеру личинки или ее рассматриваемой части. Инцистированных личинок извлекают из оболочек. Живые личинки могут не проявлять признаков активности. Их движения можно стимулировать с помощью физического раздражения, уколов личинку острой препаровальной иглой. У живой личинки уколы вызывают сокращение тела. Личинок анизакид (в физиологическом растворе) помещают на 2 ч в термостат с t = 37°C. Изменение цвета, отслоение покровов, другие деструктивные изменения тела указывают на нежизнеспособность личинок. Если видимых изменений нет, но и признаков жизни обнаружить не удается, то применяют метод химического воздействия (п.5.3.2).
5.1.2. Метацеркарий трематод, выделенных из тканей рыбы (или ракообразных) с помощью препаровальной иглы, помещают в каплю теплой воды или физраствора (37 - 40°С) на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под малым и большим увеличением микроскопа. Явное нарушение целости оболочек цист, грубые изменения внутреннего строения личинки, распад ее содержимого, разрушение экскреторного пузыря являются признаками гибели метацеркарий.
Метацеркарии обладают способностью совершать движения, находясь в цисте. Наличие даже самых слабых самостоятельных движений личинки свидетельствует о ее жизнеспособности. Отсутствие движения еще не свидетельствует о гибели. Движение можно стимулировать слабым придавливанием метацеркарий покровным стеклом.
5.2. Метод электрического стимулирования (с использованием постоянного электрического тока)
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Химические реактивы: физиологический раствор или вода
2. Большие предметные стекла (6 - 8 х 12 - 15 см, толщиной 2 - 4 мм)
3. Чашки Петри
4. Пинцеты глазные
5. Препаровальные иглы разной толщины
6. Источник постоянного тока (батарейка с напряжением 1,5 В)
7. Тонкая проволока
8. Фильтровальная бумага
9. Бинокулярный микроскоп типа МБС
10. Лупа
11. Осветитель для бинокуляра любой марки
5.2.1. Применим только к личинкам нематод, цестод и скребней. Личинок помещают на мокрую фильтровальную бумагу и воздействуют на них слабым постоянным электрическим током (0,5 - 1,5 В), пропускаемым через личинку. Для этого два тонких изолированных провода от положительного и отрицательного полюсов элемента (источника постоянного тока) проводятся к двум препаровальным иглам. Проявление сократительных движений контролируют под микроскопом типа МБС.
5.3. Метод химического воздействия (с использованием химических раздражителей)
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Химические реактивы: физиологический раствор; дуоденальное содержимое, полученное при зондировании человека или желчь животных (аптечная); трипсин (0,5%-ный раствор, приготовленный на физрастворе: 0,5 г трипсина растворяют в 100 мл физраствора)
2. Предметные стекла
3. Покровные стекла
4. Чашки Петри
5. Часовые стекла
6. Препаровальные иглы разной толщины
7. Спиртовка
8. Колба (0,1 - 0,2 л)
9. Пробирки
10. Пинцеты глазные
11. Спиртовой термометр для воды
12. Бинокулярный микроскоп типа МБС
13. Лупа
14. Осветитель для бинокуляра любой марки
15. Световой микроскоп типа Биолам, Бимам
16. Осветитель к микроскопу любой марки
17. Термостат
5.3.1. Вызвать движение личинок можно, воздействуя дуоденальным содержимым, полученным при зондировании человека, либо желчью животных, либо трипсином. В основном метод применяют для определения жизнеспособности метацеркарий трематод.
На выделенных метацеркарий наносят несколько капель химического реагента так, чтобы полностью покрыть личинок. Для ускорения эксцистирования предметное (часовое) стекло с личинками можно слегка подогреть над пламенем спиртовки, или внести предварительно подогретый до 37 - 40°С трипсин (или желчь), либо поставить в термостат с t = 37°С на 10 мин. Через несколько секунд под воздействием химического раздражителя начинается выход личинок из цист и их активное движение, что служит показателем жизнеспособности. Процесс эксцистирования личинок контролируют под микроскопом типа МБС.
Отсутствие в течение 30 мин всякой двигательной реакции свидетельствует о гибели личинок.
5.3.2. Для определения жизнеспособности личинок нематод из рыбы (моллюсков), подвергнутых ранее замораживанию или холодному копчению, гельминтов инкубируют в термостате при t = 37°С в физиологическом растворе или 0,5%-ном растворе трипсина. Личинок инкубируют в течение трех дней, ежедневно проверяя их жизнеспособность.
5.3.3. Для определения жизнеспособности личинок гельминтов можно использовать метод переваривания рыбной продукции в искусственном желудочном соке (п.3.2.11.4).
5.4. Метод флюоресценции (с использованием ультрафиолетового света)
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Люминесцентная лампа
2. Столик с прозрачной верхней крышкой (размером не менее 40 х 40 см)
3. Защитные (синие) очки
4. Большие предметные стекла (6 - 8 х 12 - 15 см, толщиной 2 - 4 мм)
5. Скальпель
6. Пинцеты (хирургические и глазные)
7. Препаровальные иглы разной толщины
5.4.1. Метод основан на способности живых и мертвых тканей многих животных флюоресцировать под воздействием ультрафиолетового света. Метод применим в основном к личинкам нематод.
5.4.2. Куски мышц рыбы (или кальмаров) или филе толщиной не более 2 см облучают ультрафиолетовым светом сначала с одной, а потом с другой стороны. При просмотре исследователь должен пользоваться защитными (синими) очками. Особенно интенсивно флюоресцируют мертвые гельминты в рыбопродукции, подвергнутой замораживанию. Характер свечения у разных видов неодинаков: личинки Anisakis имеют голубовато-белую флюоресценцию (бледную у живых и яркую у мертвых); личинки р. Contracaecum - от бледной (у живых) до ярко-желтой (у мертвых).
5.5. Метод окрашивания (с использованием красителей)
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Химические реактивы: физиологический раствор; р-р метиленового синего (метиленовый синий - 0,05 г, натрий едкий - 0,5 г, молочная кислота - 15 мл); нейтральный красный (нейтраль-рот) в разведении 1:1000 (0,1 г нейтрального красного разводят в 100 мл дистиллированной воды); 0,3%-ный р-р розоловой кислоты (аурина) (0,3 г розоловой кислоты растворяют в 100 мл 70°-ного спирта); КОН (0,1 N раствор)
2. Предметные стекла
3. Покровные стекла
4. Чашки Петри
5. Часовые стекла
6. Пинцеты глазные
7. Препаровальные иглы разной толщины
8. Фильтровальная бумага
9. Бинокулярный микроскоп типа МБС
10. Лупа
I I. Осветитель для бинокуляра любой марки
12. Световой микроскоп типа Биолам, Бимам
13. Осветитель к микроскопу любой марки
5.5.1. В зависимости от используемого красителя окрашиваются либо живые, либо мертвые гельминты.
5.5.2. Личинок нематод, цестод и скребней помещают в чашку Петри (или часовое стекло) с раствором метиленового синего. Мертвые личинки окрашиваются в синий цвет. Хорошо прокрашиваются нервные волокна и ядра клеток.
5.5.3. Живые плероцеркоиды окрашиваются водным раствором нейтраль-рота в течение 5-20 мин, приобретая стойкую розовую окраску. Для контроля личинок извлекают из краски, помещают в чистый физиологический раствор и в нем просматривают степень окрашивания. Мертвые личинки не получают стойкой окраски.
5.5.4. Для определения жизнеспособности метацеркарий трематод используют окрашивание раствором розоловой кислоты (аурина).
Кусочки мышц с личинками освобождают от жира. На ткань наносят 2 капли розоловой кислоты, а через 2 мин - 0,1 N раствор КОН, равномерно распределяя его по ткани. Избыток жидкости с препарата снимают фильтровальной бумагой. Накрывают покровным стеклом и микроскопируют.
Ткань рыбы окрашивается в розовый цвет, живые личинки совершенно не окрашиваются, а мертвые становятся розовыми.
5.6. Метод биологической пробы
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Химические реактивы: физиологический раствор
2. Лабораторные животные (золотистые хомяки, белые мыши и крысы)
3. Предметные стекла
4. Покровные стекла
5. Большие предметные стекла (6 - 8 х 12 - 15 см, толщиной 2 - 4 мм)
6. Шприцы на 2 мл с канюлями
7. Скальпели
8. Чашки Петри
9. Часовые стекла
10. Пинцеты разных размеров (хирургические, анатомические)
11. Скальпели разных размеров
12. Корнцанги
13. Ножницы разных размеров
14. Препаровальные иглы разной толщины
15. Бинокулярный микроскоп типа МБС
16. Лупа
17. Осветитель для бинокуляра любой марки
18. Световой микроскоп типа Биолам, Бимам
19. Осветитель к микроскопу любой марки
5.6.1. В некоторых случаях для окончательного заключения о виде гельминта, жизнеспособности и инвазионности личинок необходима биологическая проба - заражение лабораторных животных. Метод основан на способности большинства видов гельминтов, паразитирующих у человека, приживаться и у других млекопитающих. Наиболее удобным лабораторным животным для этой цели является золотистый хомяк. В некоторых случаях необходимо использовать других животных (котят, белых мышей и крыс).
5.6.2. Кусочки внутренних органов или мышц дополнительных (или резервуарных) хозяев с личинками скармливают лабораторным животным. Через определенное для каждого вида гельминта время (см. ниже) в фекалиях животного обнаруживают яйца паразита. Затем животное усыпляют (умерщвляют) и вскрывают методом неполного гельминтологического вскрытия. Обнаруженных гельминтов определяют до вида.
5.6.3. Цестоды.
5.6.3.1. Для дифиллоботриид в качестве лабораторных животных можно использовать золотистых хомяков, которым скармливают по 5 - 10 плероцеркоидов.
5.6.3.2. Яйца цестод могут быть обнаружены в фекалиях лабораторного животного через 2-3 недели для Diphyllobothrium latum и Diphyllobothrium luxi (D. klebanovskii), через 1 - 2 недели для Diphyllobothrium dendrilicum. При заражении золотистых хомяков спарганумами Spirometra erinacei-europaei они остаются на личиночной стадии и яйца не выделяются.
5.6.3.3. При вскрытии животных половозрелые лентецы р. Diphyllobothrium могут быть обнаружены в тонком кишечнике, спарганумы спирометры - в полости тела, внутренних органах, подкожной клетчатке, мышцах. Для получения половозрелой спирометры можно заразить собаку или кошку. В этом случае яйца гельминта можно обнаружить через 12 - 15 дней у собак и через 10 - 14 - у кошек.
5.6.4. Трематоды.
5.6.4.1. Opisthorchis felineus. Metorchis bilis, Clonorchis sinensis, Nanophyetus salmincola приживаются у золотистых хомяков. В сомнительных случаях дифференциальной диагностики между Opisthorchis felineus и Pseudamphistomum truncatum заражают молочных котят, так как Pseudamphistomum truncatum не приживаются у хомяков. Metagonimus yokogawai, Metagonimus katsuradai, Rossicotrema donicum, Apophallus muehlingi также развиваются только у котят и щенят домашней собаки. Для заражения возбудителями парагонимоза наиболее часто используют лабораторных мышей и крыс.
5.6.4.2. Существуют два основных способа заражения животных метацеркариями.
Первый - заражение личинками, содержащимися в мышечной ткани рыбы (или ракообразных). Для этого, исследуют рыбу компрессорным способом (п.3.2.11.3), замечают местоположение цист и, глядя в микроскоп МБС (увеличение: окуляр 8х, объектив 2х), верхнее стекло осторожно сдвигают в сторону и препаровальными иглами выбирают кусочки ткани вместе с метацеркариями (стараясь их не повредить). Таким образом, набирают по 30 личинок и скармливают опытным животным (золотистым хомякам массой 40 - 70 г, молочным котятам и щенятам, белым крысам массой 70 - 90 г, белым мышам массой 18 - 25 г).
Второй способ заключается во введении через рот личинок, полученных в результате переваривания рыбы (или ракообразных) в искусственном желудочном соке (см. п.3.2.11.4).
Метацеркарий отмывают в физиологическом растворе, подсчитывают, и вводят в желудок животным с помощью шприца со специальной канюлей. Описторхид вводят в количестве 50 личинок на одну особь, а парагонимид - в количестве 20 экземпляров на особь.
5.6.4.3. Выделение яиц Opisthorchis felineus, Pseudamphistomum truncatum. Metorchis bilis, Clonorchis sinensis начинается через 20 - 25 суток после заражения. При вскрытии животных через 3 - 5 недель после заражения половозрелых трематод обнаруживают в желчных протоках печени, желчном пузыре и селезенке.
5.6.4.4. Выделение яиц Metagonimus yokogawai, Metagonimus katsuradai, Nanophyetus salmincola, Rossicotrema donicum, Apophallus muehlingi начинается на 11 - 16 сутки после заражения. При вскрытии животных гельминтов обнаруживают в тонком кишечнике.
5.6.4.5. Вскрытие животных после заражения метацеркариями парагонимид производят через 40 - 60 дней. В первую очередь исследуют легкие. Затем последовательно изучают все органы и ткани, в которых могут быть обнаружены личинки, в случае развития ларвального парагонимоза или парагонимоза с атипичной локализацией.
5.6.5. Нематоды. Лабораторным животным (лучше котятам и щенятам) скармливают (или вводят с помощью пинцета) кусочки рыбы с личинками в количестве 20 - 25 экземпляров. Через 3 - 6 дней животных убивают с последующим гельминтологическим обследованием желудка и кишечника.
6. Методы фиксации и хранения паразитов
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Химические реактивы:
этанол 96° (для получения 70°-ного спирта к 100 мл 96°-ного спирта добавить 37 мл воды, а для 80°-ного - 20 мл воды); формалин (40%-ный раствор формальдегида); физиологический раствор или раствор Рингера (хлористый натрий -0,65 г, хлористый калий - 0,025 г, карбонат натрия - 0,02 г, двухлористый кальций - 0,03 г, бидистиллированная вода - 100 мл. Соли растворяют в указанном порядке. Кипятить нельзя); дистиллированная вода
2. Предметные стекла
3. Большие предметные стекла (6 - 8 х 12 - 15 см, толщиной 2 - 4 мм)
4. Чашки Петри
5. Пробирки
6. Весы с набором разновесов или весы электронные
7. Шпатели (лопаточки) металлические, стеклянные, деревянные
8. Воронки стеклянные разных размеров
9. Мерные цилиндры (0,5 - 0,25 л)
10. Банки стеклянные с притертой пробкой для хранения реактивов (0,1, 0,25, 0,5 л)
11. Банки стеклянные (или колбы) для дистиллированной воды (1 - 2 л)
12. Набор стеклянных мерных пипеток (от 1 до 10 мл)
13. Пипетки стеклянные (пастеровские)
14. Резиновые груши
15. Бюксы разных размеров
16. Пенициллиновые пузырьки
17. Пинцеты
18. Препаровальные иглы разной толщины
19. Фильтровальная бумага
20. Спиртовка
21. Спиртовой термометр для воды
22. Вата, марля
23. Бинокулярный микроскоп типа МБС
24 Лупа
25. Осветители для бинокуляра любой марки
6.1. Для фиксации желательно брать живых личинок гельминтов. Перед фиксацией паразитов следует осторожно отделить от окружающих тканей (метацеркарий трематод и мелких личинок нематод предпочтительнее с помощью метода переваривания в искусственном желудочном соке - п.3.2.11.4). Перед погружением в фиксирующую жидкость для отделения личинок от крови, слизи и других загрязнений, а также при необходимости их расправления личинок цестод и скребней следует поместить в воду, а личинок трематод и нематод в физиологический раствор или раствор Рингера на 15 - 30 мин.
6.2. Объем фиксатора должен превышать объем фиксируемого материала в 20 - 40 раз.
6.3. Личинок цестод, трематод, скребней и паразитов не установленной систематической принадлежности фиксируют в 70°-ном спирте. Для того чтобы хоботок у скребней и сколекс у цестод оставался в вывернутом состоянии, применяют способ осторожного, но достаточно сильного сдавливания червей между стеклами, подпуская пипеткой спирт 80°-ной крепости. Избыток фиксирующей жидкости оттягивают фильтровальной бумагой со стороны, противоположной пипетке. Выдерживают 15-20 мин. Затем стекло осторожно приподнимают, и личинку переносят в 70°-ный спирт.
Фиксированные в спирте, формалине и других фиксаторах метацеркарии трематод плохо сохраняют первоначальную структуру и не могут быть определены до вида. В связи с этим, допускается хранение пластинок из мышечной ткани с метацеркариями трематод в течение 7 - 10 дней при температуре 1 - 4°С.
6.4. Личинок круглых червей рекомендуется фиксировать и хранить в жидкости Барбагалло (4%-ный раствор формалина в физиологическом растворе). Чтобы тело личинки при фиксации не скручивалось, рекомендуется фиксация горячей (до 70°С) жидкостью Барбагалло.
6.5. Хранят паразитов в пробирках с фиксатором, заткнутых плотным ватным тампоном. Пробирки вкладываются в банку с притертой пробкой, заполненную таким же фиксатором. Внутрь пробирки вкладывается этикетка, написанная карандашом Т, 2Т (или любым другим средством, нерастворимым в реактивах), обращенная надписью к стеклу. На этикетке указывается вид паразита, N исследований по журналу, дата, вид рыбы (рыбопродукта), из которых выделены паразиты, место отлова (или предприятие-производитель).
Небольшие гельминты достаточно долго хранятся в фиксаторе в пенициллиновых пузырьках с полиэтиленовой пробкой.
7. Регистрация результатов исследований рыбной продукции
7.1. Результаты исследований вносятся в лабораторный журнал. В протоколе каждого вскрытия отмечаются следующие сведения:
номер вскрытия (или образца);
дата (доставки и исследования);
место отлова рыбы, моллюсков, ракообразных и т.д.: административная территория (конкретный биотоп), водоем (океан, море, река и т.п. и конкретное место вылова) или место изготовления продукции (предприятие-изготовитель);
место (фирма, предприятие) отбора проб;
какой организацией доставлена продукция, N направления;
видовое (родовое) название исследуемого экземпляра;
вид рыбной продукции (свежая, мороженая, филе, фарш, консервы и т.д.);
размер и масса (возраст) и количество пробы;
порядковый номер исследуемого экземпляра;
методы паразитологического исследования;
вид обнаруженных личинок и их число;
место локализации личинок (органы и ткани);
жизнеспособность личинок.
7.2. После проведения исследования необходимого числа (массы) экземпляров (см. СанПиН 3.2.569-96, п.6.2, п. 15.12, 15.13) регистрируются следующие показатели:
зараженность или экстенсивность инвазии - число зараженных экземпляров рыб (продукции) в пробе, выраженная в процентах;
интенсивность инвазии - амплитуда интенсивности - минимальное и максимальное число паразитов в одной зараженной особи или рыбопродукте, средняя интенсивность инвазии - число личинок, приходящееся в среднем на одну зараженную рыбу (рыбопродукт);
индекс обилия - число паразитов, в среднем приходящееся на одну исследованную рыбу или рыбопродукт (не только зараженные) данного вида; вычисляется путем деления общего числа выявленных личинок данного вида на количество обследованных рыб;
среднее число паразитов на 1 кг массы (находится делением общего числа паразитов в выборке на общую массу выборки).
Чтобы облегчить подсчет выявленных при инспектировании паразитов, цифры зараженности каждой особи (интенсивность) записываются в виде рабочей таблицы, как показано в следующем примере:
------------------T----------------------------T------------------------¬ ¦Число паразитов в¦ Число рыб (кусков), ¦ Общие количества ¦ ¦ рыбе (куске) ¦ содержащих соответствующие ¦ паразитов в рыбах, ¦ ¦ ¦ количества паразитов ¦ зараженных одинаково ¦ +-----------------+----------------------------+------------------------+ ¦ 0 ¦17 - число незараженных рыб ¦ 0 ¦ +-----------------+----------------------------+------------------------+ ¦ 1 ¦ 6 ¦ 6 ¦ +-----------------+----------------------------+------------------------+ ¦ 2 ¦ 4 ¦ 8 ¦ +-----------------+----------------------------+------------------------+ ¦ 3 ¦ 1 ¦ 3 ¦ +-----------------+----------------------------+------------------------+ ¦ 5 ¦ 2 ¦ 10 ¦ +-----------------+----------------------------+------------------------+ ¦ 17 ¦ 1 ¦ 17 ¦ +-----------------+----------------------------+------------------------+ ¦ 23 ¦ 1 ¦ 23 ¦ +-----------------+----------------------------+------------------------+ ¦ ¦ Всего обследовано рыб ¦Общее число паразитов в ¦ ¦ ¦ (кусков) - 32 ¦ выборке - 67 ¦ L-----------------+----------------------------+-------------------------
Цифры правой вертикальной колонки получаются перемножением цифр соответствующего горизонтального ряда двух предшествующих колонок. Записывается также общая масса выборки: для нашего примера примем 30 кг.
Из сделанных записей определяются следующие показатели. Экстенсивность инвазии: (15:32 х 100) = 46,9%. Амплитуда интенсивности: от 0 до 23. Индекс обилия: (67:32) = 2,1 паразитов. Среднее число паразитов на 1 кг массы: (67:30) = 2,2. Последний показатель определяют и при обнаружении паразитов, не представляющих опасности для здоровья человека и сравнивают его с "допустимым средним числом паразитов на 1 кг массы" (К) (табл.3 СанПиН 3.2.569-96, прилож.3)
7.3. Результаты исследования оформляются в виде протокола.
8. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда и реактивы
8.1. Аппаратура и инструментарий
Весы лабораторные с набором разновесов (или весы электронные)
Иглы препаровальные разной толщины
Источник постоянного тока (батарейка с напряжением 1,5 В)
Корнцанги
Кюветы эмалированные
Ножницы медицинские
Лампа люминесцентная
Лупа
Микроскоп бинокулярный типа МБС
Микроскоп биологический типа Биолам, Бимам
Молоток деревянный
Окуляр-микрометр для светового микроскопа
Окуляр-микрометр для бинокулярного микроскопа
Объект-микрометр
Осветители к микроскопу типа ОИ-7, ОИ-9, ОИ-18, ОИ-19 или других марок
Очки защитные (синие)
Пинцеты медицинские
Сантиметр или линейка
Ситечки с ячеей 1 х 1 мм
Скальпель хирургический
Столик с прозрачной верхней крышкой (размером не менее 40 х 40 см)
Термостат
Холодильник бытовой электрический (или получаемый по импорту)
Шпатели (лопаточки) металлические, пластмассовые, деревянные
Электроплитка
8.2. Лабораторная посуда и материалы
Банки стеклянные с притертой пробкой для хранения реактивов (0,1, 0,25, 0,5 л)
Бумага фильтровальная
Бюксы разных размеров
Вата медицинская гигроскопическая
Воронки стеклянные разных размеров
Груши резиновые
Животные лабораторные (золотистые хомяки, белые мыши и крысы)
Кастрюли эмалированные
Карандаш по стеклу
Колбы номинальной вместимостью 200, 400, 1000, 1600 см3
Марля медицинская
Пипетки стеклянные (пастеровские)
Пипетки вместимостью 1 - 10 см3
Пробирки
Проволока
Пузырьки пенициллиновые
Спиртовка лабораторная стеклянная
Стекла предметные для микропрепаратов
Стекла предметные (6 - 8 х 12 - 15 см, толщиной 3 - 5 мм)
Стекла покровные для микропрепаратов
Стекла часовые
Термометр жидкостный (не ртутный)
Цилиндры мерные (0,5 - 0,25 л)
Чашки биологические (Петри)
Шприцы на 2 мл с канюлями
Химические стаканы
8.3. Реактивы
Глицерин
Вода дистиллированная
Желчь сухая или желчь нативная сельскохозяйственных животных
Калия гидроокись
Калий хлористый
Кальций двухлористый
Кислота соляная
Натрия гидроокись
Натрий хлористый
Натрий углекислый
Нейтральный красный (нейтраль-рот)
Метиленовый синий
Молочная кислота
Пепсин
Раствор физиологический
Розоловая кислотаи (аурин)
Спирт этиловый ректификованный
Трипсин
Формалин
Хлороформ
Эфир
Список литературы
1. Беэр С.А., Белякова Ю.В., Сидоров Е.Г. Методы изучения промежуточных хозяев возбудителя описторхоза. - Алма-Ата 1987 - 85 с.
2. Быховская-Павловская И.Е. Паразитологическое исследование рыб - Л., 1985. - 120 с.
3. Валовая М.А., Кавтарадзе Д.Н. Микротехника. Правила. Приемы. Искусство. Эксперимент. - М., 1993. - 240 с.
4. Карасев А.Б., Митенев В.К., Довгалев А.С., Сергиев В.П. Гельминты Баренцева моря, опасные для здоровья человека. - Мурманск, 1997. - 32 с.
5. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования окружающей среды. - М., 1991. - 144 с.
6. Курочкин Ю.В. Трематоды фауны СССР. Парагонимиды. - М., 1987 - 150 с.
7. Определитель паразитов пресноводных рыб/ Под ред О.Н.Бауера - Л., 1987 - Т. 3 - 583 с.
8. Подъяпольская В.П., Капустин В.Ф. Глистные болезни человека. - М., 1958.
9. Скрябин К.И. Трематоды животных и человека. - М., 1952 - Т. 1, 4, 6.
10. Disease of marine animals. // Editor Otto Kinne. - Hamburg 1983 - V.II - 571 p.
11. Disease of marine animals. // Editor Otto Kinne. - Hamburg, 1990 - V. III - 696 p.
12. Disease of marine animals. // Editor Otto Kinne. - Hamburg, 1984. - V. IV - Part 1 - 541 p.
13. Disease of marine animals. // Editor Otto Kinne. - Hamburg 1985 - V. IV. - Part 2. - 341 p.
14. СанПиН 15-6/44, 1990. Санитарные правила по санитарно-гельминтологической экспертизе рыбы и условиям обеззараживания ее от личинок дифиллоботриид и описторхисов.
15. СанПиН 2.3.2.560-96. Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов.
16. СанПиН 3.2.569-96. Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации. Приложение 3. Профилактика гельминтозов, передающихся через рыбу, ракообразных, моллюсков, земноводных, пресмыкающихся и продукты их переработки.
17.СанПиН 2.3.4.050-96. Производство и реализация рыбной продукции.
18. ГОСТ 0001.8.1.0057, 08.12.93. Правила сертификации рыбы, рыбопродуктов и продуктов моря на соответствие требованиям безопасности.
19. Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР. Утв. МЗ СССР 20 октября 1981 г., N 2455-81.
20. Методика паразитологического исследования морской рыбы и рыбной продукции (Морская рыба - сырец, рыба охлажденная и мороженая). Утв. Минрыбхозом СССР29.12.88. - М., 1989.
21. Правила по сертификации ПР 50.3.002-95. Типовой порядок обращения с образцами, используемыми для проведения обязательной сертификации продукции.
22. Санитарные правила 1.2.731-99. Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами.
23. ГОСТ 7631-85. Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Правила приемки, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний.
24. Изменение N 2 к ГОСТу 7631-85. Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Утверждено Постановлением Гостандарта СССР от 25.10.89 N 3195.
25. ГОСТ Р 8.563-96. Методики выполнения измерений.
26. ГОСТ 7636-85. Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа.
27. Система аккредитации лабораторий Государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации. Утверждены и введены в действие Постановлением Госкомсанэпиднадзора России и Госстандарта России от 02.07.93 N 6/13.
28. Правила проведения сертификации пищевых продуктов и продовольственного сырья. Утв. постановлением Госстандарта России от 28.04.99 N 21.
Информационный лист
При разработке методических указаний использованы материалы: Т.В.Безгачиной, М.Г.Карпинского (Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии); Г.Н.Родюк, О.А.Шухгалтер (Атлантический научно-исследовательский институт морского рыбного хозяйства и океанографии); Л.В.Ларцевой, Л.И.Бисеровой (Каспийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства); Г.П.Вяловой В.В.Стексовой (Сахалинский научно-исследовательский институт морского рыбного хозяйства и океанографии); Т.Н.Цыбиной (ФЦГСЭН); В.Н.Железняка (ЦГСЭН в Химкинском районе МО).
------------------------------
*(1) СНЛК - сеть наблюдения и лабораторного контроля.
*(2) В тех случаях, когда для метацеркарии характерна подвижность внутри цисты, ее можно наблюдать не только в свежевыловленной рыбе, но и в течение нескольких дней после. Подвижность может восстанавливаться и после промораживания рыбной продукции, недостаточного по времени для гибели личинки, при повышении температуры до 37°С.
*(3) Медицинского значения не имеет.
*(4) Шипики легко отрываются при извлечении личинки из цисты и видны не всегда. Рассмотреть их без извлечения личинки из цисты не удается.